少棘蜈蚣钠通道毒素NTX-Ssm97的表达、纯化和鉴定-论文.pdf

《少棘蜈蚣钠通道毒素NTX-Ssm97的表达、纯化和鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第33卷第2期中南民族大学学报(自然科学版)VoI．33No．22014年6月JournalofSouth—CentralUniversityforNationalities(Nat．Sci．Edition)Jun．2014少棘蜈蚣钠通道毒素NTX—Ssm97的表达、纯化和鉴定尹世金，李羽欣，陆春兰，邸智勇，兰珍，胡青兰(1中南民族大学药学院，武汉430074；2中南民族大学生物医学工程学院，武汉430074；3武汉大学生命科学学院，武汉430071)摘要以同源序列比对法从湖北少棘蜈蚣毒腺转录组数据库中筛选到了一个新的毒素多肽基因NTX—Ssm97，其序列与Nav

2、1．7抑制性多肽．SLPTX．Ssm6a高度同源．采用基因工程技术，构建了pGEX-4T-1一NTX-Ssm97原核表达载体，并利用E．coliRosetta对毒素成熟肽的原核诱导表达和分离纯化．MALDI-TOF—MS质谱鉴定结果显示：纯化的NTX．Ssm97分子量与理论值基本吻合，表明少棘蜈蚣转录组数据库有助于筛选靶向Nav1．7钠通道的抑制性毒素多肽基因．关键词少棘蜈蚣；转录组；NTX—Ssm97多肽；Nav1．7钠通道；基因工程中图分类号TQ032．4文献标识码A文章编号1672-4321(2014)02-0049-05Expression，Purific

3、ationandIdentifi．cationofSodiumChannelToxinsNTX-Ssm97fromCentipedeScolopendraSubspinipesY／nShijin，LiYuxin，LuChunlan，DiZhiyong，LanZhen，HuQinglan(1Collegeofpharmacy，South-CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China；2CollegeofBiomedicalEngineering，South-CentralUniversityforNation

4、alities，Wuhan430074，China；3CollegeofLifeScience，WuhanUniversity，Wuhan430071，China)AbstractAnewtoxinpolypeptidegeneofNTX—Ssm97highlyhomologousto-SLPTX—Ssm6a，aninhibitorypolypeptideofNay1．7channels，wasscreenedbyhomologoussequencealignmentfromthevenomoustranscriptomedatabaseofcentipedeSc

5、olopendrasubspinipesfromHubeiProvince．AprokaryoticexpressionvectorpGEX-4T-1-NTX-Ssm97wasthenconstructedbygeneticengineeringtechniquesandtheNTX-Ssm97maturepolypeptideswereexpressedandpurifiedinE．colRosetta．MALDI．TOF．MSmassspectrometryshowedthatthemolecularweightsofpurifiedNTX-Ssm97were

6、consistentwiththetheoreticalvalue，suggestingthatScolopendratranscriptomedatabasecouldcontributetothescreeningoftheinhibitorypeptidetoxingenesforNav1．7channels．KeywordsScolopendra；transcriptome；NTX-Ssm97polypeptide；Nav1．7sodiumchannel；geneticengineering异常的神经病理性疼痛持续时间长、程度强烈，细胞膜上，3类钠通道的表

7、达或功能异常直接导致影响了超过20％的人类正常生活J，神经病理性疼初级感觉神经元功能异常，是神经病理性疼痛产生痛的治疗是一个世界性难题_2J．针对初级感觉神经的重要分子基础．Nav1．7钠通道由SCN9A基因编元细胞膜电压门控性钠通道寻找和设计高特异性强码，基因突变导致Nav1．7钠通道功能增强则会引发严重的神经病理性疼痛j，而引起Nav1．7钠通道效抑制剂，是当今开发镇痛药物的重要方向．Nav1．7[、Nav1．8[]和Nav1．9L6等3个亚型选择性功能减弱或丧失的基因突变导致哺乳动物疼觉缺失]，Nav1．7特异性阻断剂甚至会产生强于吗啡表达在背根神经节、三叉

8、神经节等初