小苍兰3种病毒多重RT—PCR检测体系的建立-论文.pdf

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1、福建农业学报27(4)：363~366，2012FujianJournalofAgriculturalSciences文章编号：1008—0384(2012)04—363—04樊荣辉，黄敏玲，吴建设，等．小苍兰3种病毒多重RT—PCR检测体系的建立EJ]．福建农业学报，2012，27(4)：363—366．FANR—H，HUANGM—L，wuJ-S，eta1．MultiplexRT-PCRDetectionofVirusesinFreesia[J]．FujianJournalofAgriculturalSciences，2O12，27(4)：363—36

2、6．小苍兰3种病毒多重RT—PCR检测体系的建立樊荣辉～，黄敏玲～，吴建设～，罗远华。(1．福建省农业科学院作物研究所，福建福州350013；2．福建省农业科学院花卉研究中心，福建福州350013；3．福建省特色花卉工程技术研究中心，福建福州350013)摘要：根据GenBank中已发表的小苍兰花叶病毒Freesiamosaicvirus(FreMV)、黄瓜花叶病毒Cucumbermosaicvirus(CMV)和菜豆黄花叶病毒Beanyellowmosaicvirus(BYMV)外壳蛋白(cP)基因序列保守区域分别设计特异性引物，通过优化多重PCR反应

3、条件，建立能同时检测小苍兰3种病毒的多重PCR检测体系。该体系能够一次扩增出FreMV、CMV和BYMV的特异片段，其大小分别是340、628和212bp。测序结果表明，3种病毒序列与相应的参考序列相似性均达97以上。灵敏度测定结果表明，从≥10mg的感病植物组织中能够检测到这3种病毒。关键词：小苍兰；病毒；小苍兰花叶病毒；黄瓜花叶病毒；菜豆黄花叶病毒；多重PCR中图分类号：S682文献标识码：AMultiplexRT-PCRDetectionofVirusesinFreesiaFANRong-hui’～，HUANGMin-ling’～，WUJian—s

4、he’～，LUOYuan—hua’’。(1．InstituteofCropSciences，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350013，China；2．FlowersResearchCenter，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou，Fujian350013，China；3．FujianEngineeringResearchCenterforCharacteristicFloriculture，Fuzhou，Fian350013，China

5、)Abstract：Byusingthespecificprimersdesignedonthebasisofconservedsequencesofcoatprotein(CP)gene，amultiplexPCRprotocolforthedetectionofthreemainviruses(i．e．，Freesiamosaicvirus，FreMV，Cucumbermosaicvirus，CMVandBeanyellowmosaicvirus，BYMV)infreesiawasdeveloped．Threespecificfragmentswer

6、esimultaneouslyamplifiedinasinglePCRreaction．Theirmolecularweightsweredeterminedtobe340bp，628bpand212bp．Thesequenceanalysisindicatedthatthethreevirusessharedatleast97percenthomologywithotherrelatedviruses．Themethod’Ssensitivitywasshowntobecapableofpositivelyidentifyingthethreevir

7、useswith≥10～mgoffreesiatissuesample．Keywords：Freesia；virus；Freesiamosaicvirus；Cucumbermosaicvirus；Beanyellowmosaicvirus；multiplexPCR小苍兰花叶病毒Freesiamosaicvirus限制小苍兰大规模生产的主要因素_4]。在生产中，(FreMV)、黄瓜花叶病毒Cucumbermosaicvirus小苍兰病毒尚无特别有效的化学防治方法，因此，(CMV)和菜豆黄花叶病毒Beanyellowmosaic培育和栽培无毒苗成为防治小苍兰

8、病毒病的根本措virus(BYMV)是危害小苍兰的3种主要病施。在无毒苗培育过程