重庆辣椒病毒病的病原鉴定及多重rt-pcr检测体系的构建

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1、SouthwestUniversityM．Sc．DissertationTheidentificationandmultiplexRT--PCRdetectionofpeppervirus一‘●。～’‘diseaseinChongqingCandidate：YaHuangSupervisor：LingQingSpeciality：PhytopathologyResearchField：MolecularPhytopathologySouthwestUniversity,Chongqing，ChinaApril，2015万方

2、数据独创性声明学位论文题目：重迭速塑痘麦痘的痘厦鉴廑丞垒重坠￡￡B捡测佳丕邋本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。学位论文作者：名、岔豇签字日期：2015Z月8日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生部可以将学位论文的

3、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口保密期限至年月止)。粼，鬻嚣案日戮铭签字日期：伽(￡年

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5、(月易日签字日期：“I<年易月Iil日日万方数据目录目录摘要IAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．III第一章文献综述11国内外辣椒病毒病毒源种类及危害l1．1黄瓜花叶病毒．21-2烟

6、草花叶病毒．．21．3马铃薯Y病毒．31．4烟草蚀纹病毒．31．5马铃薯x病毒3l，6苜蓿花叶病毒，41．7蚕豆萎蔫病毒2号．41．8辣椒轻斑驳病毒．41．9辣椒脉斑驳病毒．51．10番茄斑萎病毒52重庆辣椒病毒病研究现状63辣椒病毒检测及鉴定技术63．1生物学方法．63．2电镜观察法73．3血清学方法一73．4分子检测法一84本研究的目的与意义8第二章重庆辣椒病毒病样品的Dot．ELISA检测，．111材料与方法．1l1．1材料．．111．2方法112结果与分析．122．1辣椒病毒病的主要症状122．2辣椒样品的Dot—

7、ELISA检测122．3不同年份采集样品的病毒检出率比较153．讨论．15第三章辣椒病毒的分子鉴定一191材料与方法．191，1材料．．191．2方法．．202结果与分析．．232．1辣椒轻斑驳病毒的分子鉴定232．2辣椒脉斑驳病毒的分子鉴定252_3马铃薯Y病毒的分子鉴定272．4番茄斑萎病毒的分子鉴定302．5芜菁花叶病毒的分子鉴定323讨论j，万方数据西南大学硕士学位论文第四章五种辣椒病毒的多重RT-PCR检测体系的建立及应用371材料与方法371．1材料．．371．2方法．372结果与分析392．1多重RT-PCR

8、反应体系的优化．392．2多重RT-PCR扩增条件的优化402-3多重RT-PCR体系检测灵敏度的测定．402．4应用多重RT-PCR检测田间样品403讨论一42结论与展望431结论．432展望．．43参考文献。45附录A本论文所用病毒缩写及中英文对照51附录B本论文所用缩写词及中英文对照52附录C常用生化及分子生物学试剂与仪器53附录D常用试剂的配制54致谢55万方数据曼皇mi摘要l量曼曼曼曼曼曼曼曼曼喜曼皂!曼曼曼曼曼皇曼曼曼舅曼曼曼曼曼量曼曼量暑舅曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼皇曼曼曼曼詈詈詈詈詈詈喜—■■—曼量曼量重庆辣椒

9、病毒病的病原鉴定及多重RT-PCR检测体系的构建硕士研究生：黄娅指导教师：青玲摘要重庆是我国辣椒的主产区和集中消费区之一，近年来辣椒病毒病危害严重，严重影响产量和品质。为了弄清辣椒病毒病的主要毒原，本研究分别于2013年和2014年从重庆北碚、彭水、武隆、万州、石柱、巫山、巫溪、永川、九龙坡、涪陵、秀山及合川等12个区县采集了278份辣椒病毒病样品。利用烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumbe，．mosaicvirus，CMV)、芜菁花叶病毒(Turnipmosaicvir

10、us，TuMV)、蚕豆萎蔫病毒2号(Broadbeanwiltvirus2，BBWV-2)、番茄花叶病(Tomatomosaicvirus，ToMv)及番茄斑萎病毒(Tomatospottedwiltvirus，TswV)的特异性血清，采用斑点免疫杂交法(Dot—ELISA)进行检测。结果显示，从病毒总