gexp多重rt-pcr技术在病毒性脑炎病原检测中的应用

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1、中图分类号：R373．3学科分类号：310．41论文编号：密级：公珏安徽理工大学硕士学位论文GeXP多重RT—PCR技术在病毒性脑炎病原检测中的应用作者姓名：鱼玲——专业名称：一疸厘生物堂研究方向：～蹙染丝瘗疸导师姓名：王直霞熬攮导师单位：答辩委员会论文答辩日期：2012年3月万日安徽理工大学研究生处2012年5月21日ADissertationinpathogenbiologyDevelopmentofaGeXPbasedmultiplexRT—-PCRassay。。rsimultaneousdetectionofeightarboviruseassociatq!dlorsimultane

2、ousdetectionoleightarboviruseassociatedwithphalitiswithencephalitisCandidate：HeBinSupervisor：WangKexiaSch001ofMedicineAnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo．168，ShungengRoad，Huainan，232001，P．R．CHINA独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塞徵堡王

3、太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：么：马彰幺日期：翟竺年—，月习日一／J学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塞邀堡王太堂有保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于塞邀理工大堂。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽理工大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：白导

4、师签名：形荪签字日期例啤蝴夕签字日期：劢啤瑚≯摘要目的利用GeXP多重基因表达遗传分析系统，建立一种能够同时检测脑炎相关的8种虫媒病毒的多重逆转录．聚合酶链反应(mRT-PCR)方法，并对此方法作出初步评价。方法以脑炎相关的8种虫媒病毒为研究对象，包括版纳病毒(Bannavirus，BAV)，乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)，蜱传脑炎病毒(Tick—borneencephalitisvirus，TBEV)，Tahyna病毒(Tahynavirus，TAHV)，辽宁病毒(Liaoningvirus，LNV)，科萨努尔森林病病毒(Kyasanurfore

5、stdiseasevirus，KFDV)，辛德毕斯病毒(Sindbisvirus，SINV)及云南环状病毒(Yunnanorbivirus，YUOV)并加入小鼠脑脊髓炎病毒(Theiler’SMouseEncephalomyelitisvirus，TMEV)做为内部对照。利用GeXP系统建立多重RT-PCR检测方法，设计各病毒特异引物并进行筛选，以病毒分离培养物和阳性标本来验证引物及多重反应体系的特异性，根据PCR结果来优化多重反应体系及反应条件，构建单克隆质粒并进行体外转录并制备标准品即体外转录RNA的梯度稀释液来检测多重体系的灵敏度。用该方法对未知标本进行检测，并将检测结果与其它方法进行

6、比较，根据比较的结果对该方法做出评价。结果筛选后的各病毒引物扩增片段大小与设计相符且特异性强，相互之间无交叉反应。优化后的多重检测体系，可扩增出各病毒对应的特异片段，可在102拷贝／此水平同时并特异地检测出8种(共13个特异片段)脑炎相关虫媒病毒P-dNA。通过对37份蚊虫碾磨液提取核酸的标本检测，可看出GeXP多重检测方法特异性强，且灵敏度明显高于病毒分离及半巢式PCR。结论成功建立了一种基于GeXP的多重RT-PCR技术平台的8种脑炎相关虫媒病毒的检测新方法，该方法具有高通量、灵敏度高、特异性强且快速等优点，对病毒性脑炎的分子诊断及流行病学调查具有重要意义。图10表6参42关键词：GeX

7、P系统；病毒性脑炎；多重RT-PCR分类号：R373．3；摘要Abstractobjective：TodevelopaGeneomeLabGeneticAnalysisSystem(GeXP)basedmultiplexreversetranscription—polymerasechainreaction(mRT-PCR)assayforsimultaneousdetectionofeightarbovir