昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT—PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、JOURNAL0FINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vo1．24No．42014年第4期昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT—PCR检测方法的建立林二妹，白红岩孙肖红徐宝梁(1．河北省承德医学院河北承德067000；2中国检验检疫科学研究院)摘要[目的】建立昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法。[方法]利用BeaconDesigner7．0软件设计引物，以人工合成昆津病毒巴马哈森林病毒E基因的片段作为模板，验证该方法的灵敏度及特异性。[结果]最低检出限：昆津病毒1．83×10copies／12L，巴马哈森林病毒2．02×10copie

2、s／uL。[结论]建立的昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法具有灵敏度高、特异性好等特点，适合于昆津病毒和巴马哈森林病毒的快速检测。关键词昆津病毒；巴马哈森林病毒：RT-PCR中图分类号Q939．4EstablishmentofDuplexPCRofKunjinVirusandBarmahForestVirusLinErmei’，BaiHongyan，SunXiaohong，XuBaoliang。(1．ChengdeMedicalCollegeofHebeiProvince，Chengde，Hebei，067000；2．ChineseAcademyofI

3、nspectionandQuarantine)Abstract：AduplexRT-PCRmethodfordetectionofKunjinvirus(KUNV)andBarmahForestvirus(BFV)wasestablished．BasedontheEgenesegmentsofKUNVandBFVrespectively,twotwinprimersweredesignedandsynthesized，andtheRT-PCRwasdeveloped．Thespecialtyandthesensitivityweretested．Thedetecti

4、onlimitsoftheKunjinviruswas1．83x10。copies／gL，andthatofBarmahForestvirus，2．02x10。copies／L．ADuplexRT-PCRforKUNVandBFVdetectionwasestablishedandcharacterizedbyhighsensitivityandrapidity．KeyWords：KunjinVims；BarmahForestVirus；RT-PCR1前言游、人员往来日益频繁，KUNV、BFV通过各种昆津病毒(Kuniinvirus，KUNV)是黄病途径传人的可能性

5、很大，虽然我国尚未分离到这毒科黄病毒属成员，l960年在澳大利亚昆士兰两种病毒，但是存在有相关媒介蚊虫，人群中也北部的环喙库蚊(CulexAnnulirostris)中分离并曾检测有BFV抗体，如贵州省健康人群BFVIgG抗以该地区一个土著部落名字命名⋯，其他蚊种如体阳性率为1．49％，不明原因发热患者中检出BFV伪杂鳞库蚊(Culexpreudovishnui)，致倦库蚊、IgM阳性率为1．96％J，提示我国人群可能存在该Cxaustralicus和CxSquamosus等蚊种也曾分离出病毒的感染。目前，针对KUNV的检测方法有血KUNVl2。】。人感染KUNV后

6、大多数无临床症状，清学、组织免疫学检测，可作为KUNV病毒病的少数与一些非脑炎性疾病有关，伴有发热、头诊断依据，及分子生物学检测『】叫；针对BFV的检测痛、肌痛和身体不适，有时还伴有关节粘连]。巴方法有IgM抗体和IgG抗体检测]，但是能同时检马哈森林病毒(BarmahForestvirus，BFV)属于测这两种病毒的具体方法尚无报道。鉴于这两种甲病毒，首次分离于1974年】，主要传播媒介是伊病毒均主要分布于澳大利亚，传播媒介以致倦库蚊属和致倦库蚊】。BFV感染可出现发热、头痛及蚊为主，建立能同时检测这两种病毒的双重RT．肌肉和关节疼痛等症状，有时出疹，通常是在身P

7、CR方法，能有效作为口岸传染病监测的技术储躯或四肢上削。备。随着中国与世界其他国家之间的贸易、旅2材料与方法项目基金：国家质检总局公益项目(201210014)通讯作者E-mail：xubl@caiq．gov．ca·58·2014年第4期Vo1．24No．4检验检疫学刊JOURNALOFINSPECTIONANDQtJARANFINE2．1材料及反转录试剂盒：Promega公司。2．1．1仪器2．2方法生物安全柜：美国NUAIR；普通PCR仪：美2．2．1引物设计国ABI2720；超微量分光光度计：美国NanoDrop从GenBank中检索KUNV病毒34株，B