Sm3＋标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立-论文.pdf

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1、史垦塞学2014年1月第18卷第1期文章编号：1007—4287(2014)01—0001—05Sm3+标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立沈洪远，张健，胡志刚，叶燕(1．无锡市第-A民医院检验科，江苏无锡214023；2．南京医科大学附属无锡人民医院检验科)摘要：目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipinantibody，ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+62糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相

2、抗原和钐标记抗体，如果样本中存在ACA抗体，则形成ACA抗原ACA抗体一钐标记兔抗人IgM抗体复合物，加入解离增强液解离铕离子，检测荧光强度，样本中ACA—IgM抗体含量与荧光强度成正比对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析；对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及EIISA法检测ACA—IgM抗体，分析其相关性；收集5O例健康献血者，利用TRFIA检测其血清中的ACA—Ig抗体

3、，计算临床特异度。结果利用SPSS13．0统计软件进行统计学分析，TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(一20)精密度分别为2．39、3．26和3．94，批间(n一8)精密度分别为2．92、3．73和4．35；方法的灵敏度为0．1MPLU／ml；TRFIA法检测健康献血者，临床特异度为98；TRFIA与ELISA2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析，相关系数为0．956；将1份AcA—IgM抗体强阳性的血清标本从2483MPLU／L倍比稀释至0．151MPLU／I，ELISA方法较好的线性范

4、围在4．85—310．4MPLu／i，而TRFIA方法在0．151—2483MPLU／L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA—IgM抗体，对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义，该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。关键词：自身免疫性疾病；抗心磷脂抗体；时间分辨荧光免疫中图分类号：R446．62文献标识码：ADetectionofanticardiOlipinantibodyIgMbySm十。labeledtime-resolvedfluoro

5、immunoassaySHENHong—yuang，ZHANGJiang，HUZhi—gang，eta1．(WuxiNo．2People’SHospital，JiangsuWuxi214023，China)Abstract：ObjectiveInanefforttOimprovethequantitativedetectionofaCLIgM，wedevelopanewimmunoassaytOimproveaCLIgMdetectionbasedonTRFIA．MethodsUsingthecomplexo

6、fcardiolipinplusbovine~2GPIasantigenandSm抖一labeledrabbitanti—humanIgMascon]ugate．Theprecision，sensitivity，specificity，coefficientofrecoveryandstabilityoftheassaywereevaluatedandcomparisonwiththeclassicalELISAWasalsomade．ResultsTheaCLIgMTRFIAkitweestablished

7、hadawiderdetectablerangethancommercialELiSAoneswhendilutedaspecimenwithstrongpositivefrom0．1512483MPLU／L．WeobservedthatfortheestablishedTRFIAkittherewasagoodlinerrangewithin0．151-2483MPIU／L，whereasitwaswithin4．85—310．4MPIU／LwhenusingELISAkits．Theintraas—say

8、precisionrateandtheinterassayprecisionratewere<5for3differentconcentrations．Thesensitivitywas0．1MPIU／mlandtheclinicaldiagnosticspecificitywas98．Averagerecoveryratewas101．13．Theestablishedassaykitalsobe