人心磷脂抗体IgM

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4、用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中ACAIgM含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中ACAIgM水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ACA、生物素化的抗人ACAIgM抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ACAIgM呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样

5、品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100MPLU/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成100MPLU/mL，50MPLU/mL，25MPLU/mL，12.5MPLU/mL，6.25MPLU/mL，3.12MPLU/mL，1.56MPLU/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0MPLU/mL，临用前15分钟内配制。如配制50MPLU/mL标准品：取0.5ml100MPLU/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。3.样品稀释液：

6、1×20ml/瓶。4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液A。8.底物溶液：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍

7、。10.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。标本的采集及保存1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤各试剂在使用前平衡至室温。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，注意不要有气泡，轻轻混匀

8、，酶标板加上盖，37℃反应120分钟。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。3.每孔加检测溶液A工作液