大鼠脊髓少突胶质前体细胞的培养与鉴定方法-论文.pdf

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1、卒中与神经疾病2014年8月第21卷第4期·199·大鼠脊髓少突胶质前体细胞的培养与鉴定方法李彩红张婷陈雪王伟骆翔喻志源【摘要】目的探讨大鼠脊髓少突胶质前体细胞(OPCs)的分离纯化及诱导分化方法。方法取出生后3d内SD大鼠脊髓，采用0．125％胰蛋白酶消化获取原代混合胶质细胞，培养10d左右在37℃恒温摇床采取180r／rain摇速振摇并差速贴壁40min获得纯化的OPCs；取纯化后培养3d的OPCs免疫荧光鉴定细胞纯度或诱导分化。结果采用胰蛋白酶消化法获取原代混合胶质细胞、振摇并差速贴壁法分离纯化能够得

2、到纯度较高的OPCs，折光性强，呈双极或三极形态，免疫荧光染色显示95细胞表达A2135和NG2(OPCs标志物)，经诱导分化后表达04及MBP(少突胶质细胞标志物)。结论采用振摇差速贴壁法可从大鼠脊髓中分离纯化获得高纯度的OPCs，获得的OPCs体外生长稳定，经诱导可分化为成熟的少突胶质细胞。【关键词】少突胶质前体细胞脊髓细胞培养免疫荧光【中图分类号1R744【文献标识码】A【文章编号】1007—0478(2014)04—0199-04[DOI]10．3969／j．issn．1007—0478．2014．

3、04．002IsolationandidentificationofoligodendrocyteprecursorcellsofratspinalcordLiCaihong，ZhangTing，ChenXue，eta1．DepartmentofNeurology，TongjiHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversi—tofScienceandTechnology，Wuhan430030[Abstract]ObjectiveToexploretheimpr

4、ovementmethodofisolationandidentificationofoligodendro一'cyteprecursorcellsofneonatalratspinalcordinvitro．MethodsThemixedglialcellsfromSDratsspinalcordwereobtainedbyusingthe0．125trypsindigestion．About10dayslater，OPCswereisolatedandpuri—fledbytheshakingproce

5、ssanddifferentialadhesion，andculturedinOPCsmedium_ThegrowthpatternofOPCsinvitrowasobservedbyinvertedmicroscope，andimmunofluorescenceassaywasappliedtoidentifytheOPCswithNG2，A2135andtheoligodendrocyteswith04andMBP．ResultsPurfiedOPCswereobtainedinthismethodby

6、theshakingprocessanddifferentialadhesion．Enriched0PCsarephasebrightwithtypicalbi—polarortripolarmorphology．Morethan95ofthecellswereNG2andA2B5positive．Meanwhile，theOPCscanbeindueeddifferentiationtOoligodendrocytes，whichwere04andⅣ嵋Ppositive．Conclusions0PCSca

7、nbeseparatedandpurifiedbyshakinganddifferentialadhesionfromSDratsspinalcord．Meanwhile，OPCscanbeinduceddifferentiationto0lig0dendrocytesinvitro．[Keywords]O1igodendrocyteprecursorcellsSpinalcordCellcultureImmunofluorescence随着现代化进程，交通及建筑事业的迅速发展，OPCs)的增殖分化[3]。

8、OPCs是处于分化早期的未脊髓损伤(spinalcordinjury，SCI)的发病率急剧上成熟细胞，既能定向分化为成熟的OLs，又具有一升。SCI导致原发性机械损伤和损伤区缺血缺氧导定的增殖与迁移能力。因此，优化脊髓OPCS的分致的继发性级联损伤[1]，其中缺血缺氧使少突胶离纯化方法，建立其体外培养分化模型，对进一步研质细胞(oligodendrocytes，OLs)大量死亡，引发广泛究脊髓损伤后髓鞘修复、轴突