新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定

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1、新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定.L.编辑。【摘要】［目的］探讨新生（spraguedaaryculturefromneonatalratcerebralcorticesandstudythemethodsofcellcultureandisolationinordertoobtainpurifiedOPCsfortheexperimentsofcelltransplantation.［Method］Themixedglialcellsfromthecerebralcorticesof48houroldSpragueDaedium.

2、ThegroicroscopyandOPCsmunocytochemicaltechniques.［Result］ThedistinctstratificationofOPCsandastrocytesdevelopedaround9-10daysinprimaryculture.Atthispoint,theOPCsscatteredonthetopofthemonolayerastroctyesandthesomaofmostOPCstypicallyappearedovalorroundatureoligdendrocytesmunoreactiv

3、etothespecificantigenofoligodendrocytelineagecells,Oligo2.［Conclusion］OPCsseparatedfromthecerebralcorticesofneonatalSDratscanbemaintainedasimmatureprecursorcellsinculture,andOPCsareabletobepurifiedbyshakinganddifferentialadhesionundertheconditionofappropriatecellstratification.Ke

4、yyelination;spinalcordinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤，可以造成患者严重的神经功能损害。目前，临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。随着研究深入，人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。脊髓损伤不仅导致神经元丢失，同时还造成大量少突胶质细胞的死亡，从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变，进一步影响了脊髓神经功能的恢复。近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤，有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化，促进损伤脊髓的神经功能恢复［1,2］。研究表明，少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突，同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突

5、生长等作用［3］。此外，少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞，既能够定向分化为成熟少突胶质细胞，同时又具有一定的增殖与迁移能力［4］，更加适合于细胞移植治疗。因此，研究少突胶质前体细胞移植治疗脊髓损伤，促进脱髓鞘轴突再髓鞘化具有重要的意义。经体外培养获得大量少突胶质前体细胞是开展这些实验研究的重要前提，故本实验就如何获得纯化的少突胶质前体细胞进行初步探讨。1材料和方法1.1材料出生48h的新生（spragueda细胞滤网、显微解剖器械等。Dulbecco'sModifiedEagleMedia(DMEM)(GIBCO)，Hanks平衡盐溶液(G

6、IBCO)，标准胎牛血清(TBD)，多聚赖氨酸(Sigma)，L-谷氨酰胺(GIBCO)，丙酮酸钠(Amreseo)，牛胰岛素(Sigma)，转铁蛋白(Sigma)，亚硒酸钠(Sangon)，甲状腺素(Sigma)，台盼蓝(Sigma)，兔抗人胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidprotein,GFAP)多克隆抗体(中杉金桥)，兔抗人少突胶质细胞转录因子2(Oligodendrocytelineagespecifictranscriptionfactor,Oligo2)多克隆抗体(中杉金桥)，ABC试剂盒(中杉金桥)，DAB试剂盒(

7、中杉金桥)。基本培养基：DMEM含10％胎牛血清、0.6%葡萄糖、4mmol/L谷氨酰胺、5mmol/L丙酮酸钠、50u／ml青霉素、50μg／ml链霉素。定向培养基：DMEM含0.5％胎牛血清、50μg/ml转铁蛋白、5μg/ml胰岛素、30nmol/L亚硒酸钠、30nmol/L甲状腺素、4mol/LL谷氨酰胺、5mmol/L丙酮酸钠、50u／ml青霉素、50μg/ml链霉素。1.2少突胶质前体细胞培养混合胶质细胞培养：取新生48hSD大鼠，颈动脉放血，在体视显微镜下无菌取出大脑半球，切除脑干及海马，彻底清除脑膜、血管等组织，转入Hanks平衡盐溶液

8、内清洗皮层组织。用显微解剖剪小心剪碎皮层至约1mm3大小的组织块，轻柔吹打制成细