藏红花病毒病原的分子鉴定-论文.pdf

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1、荡ChineseTraditionalandHerbalDrugs第44卷第8期2013年4月·1033·藏红花病毒病原的分子鉴定谢礼一，吕明芳，董峰丽，饶君凤，毛碧增，洪健1．浙江大学生物技术研究所，浙江杭州3100582．浙江省农业科学研究院病毒学与生物技术研究所，浙江杭州3100213．杭州职业技术学院，浙江杭卅I310018摘要：目的研究栽培藏红花的病毒病原。方法综合运用病毒粒子形态和细胞病理学电镜观察、DAS—ELISA检测、RT-PCR检测及序列测定等技术进行病原鉴定。结果透射电镜负

2、染色观察到病株汁液含有600~900am的线状病毒粒子；超薄切片观察到病株细胞质内有大量线状病毒粒子、II型风轮状内含体和电子致密无定型体，符合菜豆黄花叶病毒Beamyellowmosaicvirus(BYMV)的病理学特征。应用BYMV抗体进行病株DAS—ELISA检测结果为阳性，应用马铃薯Y病毒属特异性引物Sprimer和M4对病株进行RT-PCR检测结果为阳性，对阳性结果进行分子克隆及序列测定发现目标序列与BYMV有99％的同源性。结论综合检测结果判明侵染浙江藏红花的病毒病原为BYMV。关

3、键词：藏红花；病原鉴定；菜豆黄花叶病毒；分子鉴定；分子克隆中图分类号：R282．12文献标志码：A文章编号：0253．2670(2012)08．1033．04Doh10．7501~．issn．0253—2670．2013．08．022MolecularidentificationofviralpathogensinCrocussativusXIELi1，2LVMing．fang，DONGFeng—li，RAOJun．feng3MAOBi．zeng1HONGJian1，，，1．Instituteo

4、fBiotechnology，ZhejiangUniversity,Hangzhou310058，China2．InstituteofVirologyandBiotechnology,ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China3．HangzhouVocationalandTechnicalCollege，Hangzhou310018，ChinaAbstract：0bjectiveToinvestigatetheviralp

5、athogensincultivatedCrocussativus．MethodsViralpathogenidentificationwascarriedoutbytheobservationofvirusparticlemorphologyandcytopathologyaswellasthedetectionofDAS—ELISA，RT-PCR，andsequencing．ResultsLinearvirusparticlesof600--900riminlengthwereobserve

6、dinCsativusbynegativestainingundertransmissionelectronmicroscope(TEM)．Bundlesoflinearvirusparticles，cylindricalinclusionbodiesofsubdivisionII，andamorphousinclusionbodieswereobservedinthecellsofCsativusunderTEMafterultrathin—section．Theseobservationsr

7、esembledthecytopathologyofinfectiousBeanyellowmosaicvirusrBYMV)．PositiveresultofDAS-ELISAwasobtainedfromtheleavesofCsativusbyusingmonoclonalantiserumagainstBYMVcapsidprotein．PositiveresultofRT-PCRinducedbythePotyvirusspecificprimers(SprimerandM4、wasa

8、lsoobtained．SequencingafterRT-PCRrevealedthattheviralsequenceinthisdiseasedCsativushadahomologyof99％withtheBYMVsequence．ConclusionThepathogenicvirusofthisCsativusdiseaseisidentifiedasBYMV．Keywords：CrocussativusL．；pathogenidentification；Beamyellowmosa