魔芋灰霉病病原菌的分子鉴定-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(20)：6560—6561责任编辑李占东责任校对李占东魔芋灰霉病病原菌的分子鉴定刘小芳，潘亚妮，将巧龙，刘二喜，赵青华，牟方贵，杨朝柱(湖北省恩施州农业科学院魔芋研究所，湖北省农业科技创新中心鄂西综合试验站，湖北恩施445000)摘要[目的]对魔芋灰霉病病原菌进行分子鉴定。[方法]通过提取DNA、PCR扩增、电泳检测以及魔芋灰霉病病原茵rDNA的ITS序列分析。[结果]采用CTAB法得到的DNA产量较高且纯度较好；以其为模板进行PCR扩增，条带清

2、晰；ITS序列测序证实魔芋灰霉病病原茵属于富氏葡萄孢盘茵(Botryotinicafuckeliana)，Genbank登陆号KF802809。[结论]该致病菌在魔芋种芋储藏期间和设施繁育过程中危害极为严重，属首次报道，为魔芋灰霉病的防治提供理论依据。关键词灰霉病；PcR扩增；ITS中图分类号S181．3文献标识码A文章编号0517—6611(2014)20—06560—02MolecularIdentificationofKonjacBotry麻cinereaPathogensLIUXiao-fangetal(Koni

3、acResearchInstituteofEnshiAutonomousAcademyofAculturalScience，WesternHubeiComprehensiveExpefi—mentalStationofHubeiProvinceAculturalSeienceandTechnologyInnovationCenter，Enshi，Hubei445000)AbstractfObiective]TheresearchaimedtoidentifyBotrytiscinereaofKonjacpathogens

4、．【MethodIDNAextraction，PcRamplification，elee—trophoresisandtheanalysisofI1ssequenceofButrytiscinerearDNA0fK0acpathogenswereconducted．【ResuitlIlheresultsshowedthatthemethodofCTABwassuitableforDNAwithhighyieldandpurity．ThequailtyofDNAcouldmeetPCRrequirement．whichf0

5、rPCRamplificationcouldproduceclearbands．ThepathogenswereidentifiedasBotryotinica缸keliana．TheaccessionnumberofGenbankwa8KFg02809．[Conelu—sion]rnledamageofthispathogenwasveryseriousintheperiodofKonjacseedstorageandtheprocedureofbreedingfacilities．Itwasthefirstrepor

6、tandtheeonclusloBsprovidedtheoreticalbasisforpreventionandcontrolofBotrytiscinereaofkonjac．KeywordsBotrytiscinema；PCRamplification；ITS灰霉病是露地、保护地作物常见且较难防治的一种真菌1．3PCR扩增及序列测定性病害¨，它能侵害多种不同的植物，包括蔬菜、中草药、作1．3．1引物。灰霉病病原菌的rDNA的ITS区域PCR扩增物、草坪、果树等。。近年来，随着魔芋人工种植面积的不选用的通用引物为I

7、TS4和ITS5，其碱基序列：ITS4(5’一TCC断扩大及种植年限的增加，魔芋灰霉病的发生及危害性逐年TCCGCTTATTGATATGC-3’)，ITS5(5’一GGAAGTAAA加重，严重影响了魔芋种植业的发展和魔芋的产业化。然AGTCGTAACAAGG·3’)。而，大多对灰霉病病原菌的鉴定仅局限在传统的菌物分类系1．3．2PCR扩增。25l反应体系：10×Buffer(含MgC12)2．统上，而传统的菌物分类是以其形态特征和生理生化指标为51；2．5mmoL／LdNTP1；10mmol／L引物各0．5txl；2．5

8、分类基础，大部分菌物的种类多且分布广，形态特征也较复U／ulTaq酶0．21；ddH2019．3Ixl，模板2l。反应条件：94杂，且少数形态特征和生理生化指标随着环境的变化而不稳℃预变性5min；94oC变性45s，58oC退火45s，72oC延伸45定]。近年来，人们利用病原菌核糖体ITS基因区段的扩s。35个循