三七病毒病病原种类鉴定及其相关病毒分子变异分析

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1、分类号：密级：UDC：编号：硕士学位论文三七病毒病病原种类鉴定及其相关病毒分子变异分析IdentificationofthePathogensofPanaxnotoginsengViralDiseasesandMolecularVariationAnalysisoftheRelatedViruses硕士研究生：李晓静指导教师：李凡教授申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学培养学院：植物保护学院二〇一四年五月IdentificationofthePathogensofPanaxnotoginsengViralDiseasesandMolecularVariation

2、AnalysisoftheRelatedVirusesAThesisSubmittedtoYunnanAgriculturalUniversityInSpecialFulfillmentoftheRequirementfortheMasterDegreeofPlantPathologyCandidate:LiXiaojingSupervisor:Prof.LiFanCollegeofPlantProtectionYunnanAgriculturalUniversityKunming650201，P.R.CHINAMay，2014独创性声明本人声明所呈交的学位论文是

3、本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得云南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解云南农业大学有关保存、使用学位论文的管理办法及规定，即：云南农业大学有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意云南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发

4、表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要三七是我国中药材中的一颗明珠，具有非常重要的药用和医疗保健价值。但因其特殊的生长、管理条件，很容易造成病毒病的发生，该病害的发生严重影响三七的生活力，降低三七的产量和质量，对生产构成严重的威胁。但到目前为止，有关三七病毒病的研究很少，而且现有的研究也仅仅停留在三七病毒病原物的鉴定层面上。植物病毒病被称作是―植物的癌症‖，防治植物病毒病最重要的工作首先就是要明确病毒病原物，然后才能通过分析各个病原物的传播方式、寄主范围及发生规律等方面防控病毒病的

5、发生。鉴于此，本文旨在通过对三七病毒病病原物开展进一步的鉴定研究，探明三七病毒中除三七Y病毒（PanaxvirusY，PnVY）外的其他种类及优势种，明确其寄主范围，确定病毒分离物/复合体与症状类型的相关性，为进一步深入开展相关病毒的致病性分子机理、病害的监测和预报以及有效防控提供坚实的理论基础和技术指导，并对国内外该领域的相关研究工作起到一定的借鉴和推动作用。本文以三七病叶为材料提取dsRNA及提纯病毒，并尝试以dsRNA为模板构建cDNA文库得到可能的病毒种类，以三七病毒提纯产物为材料通过电镜技术和SDS-PAGE、质谱分析技术分别进行病毒粒子形态观察及可能的

6、病毒种类初步鉴定。结果经dsRNA、提纯病毒及电镜技术等再次验证三七病样除了PnVY之外还存在不止一种病毒病原物。而由于提取的dsRNA浓度过低，致使没能成功完成对cDNA文库的构建。质谱分析的结果显示三七病样中可能存在大豆矮缩病毒（Soybeandwarfvirus，SbDV），但经SbDV特异性引物检测及序列分析，并未在该批三七病样中检测到SbDV。应用双生病毒（geminiviruses）的基因组DNA及卫星（betasatellite）的DNA检测通用引物和中国番茄黄化曲叶病毒（TomatoyellowleafcurlChinavirus，TYLCCNV）

7、的特异性引物，在三七病样YWSh03中检测到了的TYLCCNV和TYLCCNB，并获得了TYLCCNV和TYLCCNB的全长基因组序列。然后将含有TYLCCNV及TYLCCNB侵染性克隆的农杆菌菌悬液、菌落接种至三七叶片上，并且通过获毒的粉虱对三七进行传毒试验。结果农杆菌接种的三七苗都表现为黄化症状，而粉虱传毒的三七苗症状不明显，但通过PCR检测均能检测到TYLCCNV和TYLCCB。通过分子生物学和生物学的方法证实了TYLCCNV及TYLCCNB对三七的侵染，完成了柯赫I氏法则的验证，这是TYLCCNV及TYLCCNB侵染人参属植物的首次报道。以三七病叶、dsR

8、NA和病毒