资源描述：
《反相高效液相色谱的基本原理及其应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、万初筒者麟摺色麟恢参颇秘级真应屠20韶卒著3娜反相高效液相色谱的基本原理及其应用刘桂洋’·’,毛香菊2,陈晋阳.,(l上海大学化境与化学,;2.工程学院上海20180武汉大学化学与分子科学学院湖北武汉430072:,、、,摘要高效液相色谱经过30年的发展在色谱理论研究仪器研究水平分析实践应用等方面已经取得长足的进步.本文主要介绍了反相高效液相色谱的基本原理和特点,以及影响因素,并对其在生物化学和生物,,.工程中的应用在环境监测中的应用在精细有机合成中的应用进行了举例:;;关键词反相高效液相色谱保留值液相色谱的应用:57.7十2:中圈分类法06文献标识码A前言更广泛。Ll反相高效液相色谱简介LZ
2、反相键合相色谱法的分离原理l闪”l随着高效液,相色谱的快速发展各种新的色谱在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合。,。,技术不断涌现其中反相高效液相色谱因其良好固定相它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体,,、、的选择性应用的显示出很好的应c4c:C、8)或苯基范围不断扩大经酸活化处理后与含轻基链(。,用前景1卜l5]的硅烷化试剂反应生成表面具有烷基或苯基的非反相高效液相色谱是化学键合相色谱法的。一极性固定相如共价结合到载体上的直链碳氢化合种。化学键合相色谱法是由液液色谱法发展起来物。正辛基等,,,的是为了解决在分离过程中机械吸附在载体上关于反相色谱的分离机理吸附色谱的作用机。,的固体液的流失问题
3、而发展出来的一种新方法键制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用在。合相色谱法通过将不同的有机官能团通过化学反高效液相色谱中又被称为疏溶剂作用1’l根据疏溶,,,应共价键合到硅胶载体表面的游离经基上而生成剂理论当溶质分子进入极性流动相后即占据流,,。化学键合固定相化学键合固定相对各种极性溶剂动相中相应的空间而排挤一部分溶剂分子当溶。都有良好的化学稳定性和热稳定性由它制备的色质分,子被流动相推动与固定相接触时溶质分子的、、,谱主柱效高使用寿命长重现性好几乎对各种非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附,,类型的有机化合物都呈现良好的选择性并可用于着的溶剂膜排挤开而直接与非极性固定相上的烷,。梯
4、度洗脱操作消除了分,配色谱法的缺点基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物构成单,。,根据键合固定相和流动相相对极性的强弱可分子吸附层这种疏溶剂的吸附作用是可逆的当,,将键合色谱法分为正相键合色谱法和反相键合色流动相极性减少时这种疏溶剂斥力卜降会发生..,。谱法反相键合色谱法即反相高效液相色谱在正解缔并将溶质分子解放而被洗脱下来上述疏溶,。相键合色谱法中键合固定相的极性大于流动相的剂作用机制可如图l所示,极性适用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性反相色谱中疏水性越强的化合物越容易从流.,,,化合物在反相键合相色谱法中键合固定相的极动相中挤出去在色谱柱中滞留时间也长所以反、性小于流动相的极性适用于分
5、离非极性极性或相色谱法中不同的化合物根据它们的疏水特性得,。离子型化合物其应用范围也比正相键合相色谱法到分离反相色谱法适于分离带有不同疏水基团的··2宁必刃从铭为口Chemicalln幽s勺20韶字男3娜淤,。,,,化合物亦即非极性基团的化合物此外反相色溶的有机溶剂以得到不同强度的流动相这些有。。谱法可用于分离带有不同极性基团的化合物可以机溶剂称为修饰剂反相色谱中最常用的有机溶剂,,,、、通过改变流动相的溶剂及其组成和pH以影响溶有甲醇和乙睛此外乙醇四氢吠喃异丙醇及,。质分子与流动相的相互作用改变它们的滞留行二氧六环也常被用作修饰剂。,为另外反相色谱中水的流动相中占的比例伸缩1.3影响溶质保留
6、值的三个因素,一,性很大可以从0t00%从而使反相色谱可用于烷基键合固定相对每种溶质分子缔合作用和、。水溶性脂溶性化合物的分离反相色谱法中的固,解缔作用能力之差就决定了溶质分子在色谱过程定相是被共价结合到,硅胶载体上的直链饱和烷烃。:的保留值以下简述影响溶质保留值的二个因素,最长的是十,其链的长短不同八烷基这也是使用l)溶质分子结构。得最多的固定相直链饱和烷烃疏水特性随着碳氢,在反相键合相色谱法中溶质的分离是以它们链的,长度而增加在反相色谱柱中溶质由于疏,,的疏水结构差异为依据的溶质的极性越弱疏水性也强,保留值越大。根据疏溶剂,理论溶质的保留值与其分子中非极性部分的总表面积有关,其与烷基键合固
7、定相结出的面积愈人,保留值越人。2)烷基键合固定相的特性烷基键合固定相的作用在于提供非极性作用表面,因此键合到硅胶表面的烷基数量就决定着溶质容量因子的大小。烷基的疏水特性随碳链的加长,而增加溶质的保留值也随着烷基碳链长度的增加而增人。随着烷基碳链的增长,增加了键合相的非,,极性作用的表面积其不仅影响溶质的保留值还影响色谱柱的选择性,即随烷基碳链的加长其对溶质分离的选择性也增大。3)流动相性质图1反
