仪器分析实验(二).doc

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1、实验二：食品中对羟基苯甲酸酯类的检测方法2010306006282010级食品营养1班杨柳对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，

2、则会危害人体健康。各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。不同商品中的最大限量：对羟基苯甲酸甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。1实验目的1.1学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；1.2熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；1.3学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。2实验原理高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法和

3、气相色谱的基础上发展起来的，(经典液相色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气象色谱原理类似，流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配合程序升温可分析高沸点的有机化合物。)弥补了经典液相色谱和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适合

4、于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。由于80%的有机化合物都可以用高效液相色谱法分析，目前已经广泛应用于生物工程、制药工业、食品工业、环境检测、石油化工等行业。在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有多种酯类，它们都是强极性化合物，可采用超高压液相色谱进行分析。以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。X=(A2×C)/A1（其中：X为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量，单位为ug/mL；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。）1实验材料与

5、仪器3.1材料：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙腈、甲醇（均为分析纯）、超纯水3.2仪器：Waters超高压液相色谱仪（ACQUITYUPLC）、超声波清洗仪、超纯水制备仪、万分之一天平2实验方法按照GB/T5009.23—2003的方法测定食品中对羟基苯甲酸酯类的含量。4.1标准液的制备标准混合使用液：精密称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯各0.01g，用一只100mL容量瓶以乙腈：水＝1:1中定容，吸取1mL，于25mL容量瓶中水定容，配制浓度均含4µg·mL-1的酯类混合物的标准溶液，混

6、匀备用。4.2样品的处理称取5g样品，加入40mL乙腈，用超声波萃取30min，过滤，用微孔滤膜抽滤待测。4.3实验条件的选择(1)色谱柱(2)流动相乙腈：水（50：50），流量0.3mL·min-1(3)监测器紫外光度监测器，254nm，灵敏度0.04(4)记录仪量程5mV，纸速480mm·h-1(5)进样量2µL(6)柱温40℃4.4测定(1)将配制好的流动相乙腈、超纯水置于超声波发生器上脱气15min。(2)根据实验条件，将超高压液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时，记录仪基线呈平直，即可进样。(3)

7、依次分别吸取2µL的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图，在每次进样后，于进样信号附近标明进样溶液的名称。5实验结果及分析5.1根据标准品色谱图中的保留位置，找到并标出样品色谱图中的对羟基苯甲酸酯类的色谱峰位置，得出峰面积。如图1。图1实验结果（液相色谱图）样品保留时间（分钟）面积微伏/秒15.13151384627.422534453311.699536248标品保留时间（分钟）面积微伏/秒14.95998930527.1471059467311.26410841645.2以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯

8、甲酸酯类含量。数据处理结果如表1。表1数据处理表序号标样保留时间（min）标准液质量浓度C（ug/mL）标样的峰面积A1（微伏/秒）样品的峰面积A2（微伏/秒）样品中对羟基苯甲酸酯类的含量X（