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1、第45卷第10期2015年10月中国海洋大学学报PERl0DICALOF0CEANUNIVERSITYOFCHINA45(10):050~0550ct.。2015海带多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血症的调节+焉翠蔚1,李晶1,姜柳2,田友昊1,常宝1(中国海洋大学1.海洋生命学院;2.食品科学与工程学院,山东青岛266003)摘要:采用紫外分光光度法研究了海带多糖在体外对黄嘌呤氧化酶(XOD)的抑制作用,以氧嗪酸钾作为诱导剂腹腔注射小鼠建立高尿酸血症模型,研究了海带多糖对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平和肝脏中XOD的活性的影响。结果表明,体外实验中海带多糖对XOD有明显的抑制作
2、用,其IC5。为0.88mg/mL,与别嘌呤醇的联合抑制作用类型为协同作用。海带多糖高、中剂量组均能显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平,并且对肝脏中XOD活性的抑制作用显著。初步认为,海带多糖可以通过抑制XOD的活性对氧嗪酸钾所致的高尿酸血症起到改善作用。关键词:海带多糖;黄嘌呤氧化酶;抑制作用;高尿酸血症;血清尿酸水平中图法分类号:Q539文献标志码:A文章编号:1672—5174(2015)lO一050—06DOI:10.16441/].cnki.hdxb.20140335近年来,中国高尿酸血症患病率明显上升,患者的发病年龄提前,呈年轻化趋势。高尿酸血症是一种因体内嘌呤代谢紊乱引
3、起的代谢性疾病,其发病原因主要是由于机体内尿酸生成过多,排泄减少,或者二者同时作用[1]。高尿酸血症是痛风的生化特征,据统计,大约有5%~12%的高尿酸血症最终会发展成为痛风[2‘。持续性的高尿酸血症会引起高血压、高血脂、心血管疾病、慢性肾病等并发症的发生[3巧]。目前用于高尿酸血症临床治疗的药物主要有2类:(1)降尿酸药物,代表药物为别嘌呤醇,主要通过抑制嘌呤代谢关键酶黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性,降低体内尿酸的含量;(2)促尿酸排泄药物,此类药物主要有丙磺舒、苯磺唑酮、溴苯马隆,能够帮助肾脏排出体内多余的尿酸[6]。别嘌呤醇是XOD的竞争性抑制剂,一直被作为一线药物用于临床高尿酸血
4、症和痛风的治疗。在临床上,别嘌呤醇存在一些严重的毒副作用,在一定程度上限制了其安全使用。目前,利用化学合成与微生物发酵的方法得到的XOD抑制剂虽然在体外对XOD具有良好的抑制作用,但都未能成功应用于高尿酸血症的临床治疗。因此,从天然生物材料中寻找新型无毒高效的抗高尿酸血症药物已经成为目前抗高尿酸血症药物研究的热点问题。海带多糖具有调节免疫、抗肿瘤、抗凝血、降血脂、降血糖、抗辐射、抗突变、抗体内氧化和耐缺氧等多种生物学活性[7],但有关其调节体内XOD活性,降低血*基金项目:山东省科技计划项目(2012GHYll525)资助收稿日期:2014—10—15;修订日期:2015—04—18作
5、者简介:焉翠蔚(1963一),女,教授。E-mail:cuiweiyan@OUC.edu.cn清尿酸水平的报道较少。本实验研究了海带多糖体外对XOD的抑制作用,并通过腹腔注射氧嗪酸钾建立小鼠高尿酸血症模型,研究海带多糖对高尿酸血症小鼠的降尿酸效果。1材料与方法1.1材料新鲜海带采购于青岛市齐东路水产品市场,将清洗后的海带用蒸馏水反复冲洗,烘干至恒重,粉碎,过60目筛,放入密封袋内贮存备用。雄性昆明种小鼠60只,体重(33.0±2.2)g,购于青岛市药品检验检疫所。1.2试剂和仪器DEAE-52纤维素凝胶、SephadexG-200葡聚糖凝胶为天津博迪化工股份有限公司产品;黄嘌呤(Xan
6、—thine)、黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase,X1875)为Sigma公司产品;别嘌呤醇(Allopurin01)为上海宝曼生物科技有限公司产品;氧嗪酸钾(PotassiumOxonate)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为北京华迈科生物技术有限公司产品;其它实验试剂均采用国产分析纯。电子天平(FAl004型);集热式磁力搅拌机(DF-101S型);高速冷冻离心机(HC.3018R型);旋转蒸发仪(N一1100型);FT-IR红外光谱仪(Nexus一470型);紫外可见分光光度计(UV-2800型);全自动血液生化分析仪(B孓200型)。10期焉翠蔚,等:海带多糖对黄嘌
7、呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血症的调节1.3方法1.3.1海带多糖的制备[8]称取海带干粉10g,以1:40的料液比加入蒸馏水,70℃水浴浸提4.5h,离心,取上清;将上清液用旋转蒸发仪真空减压浓缩,Sevag法除去蛋白质[9],加入95%乙醇4℃,静置过夜,离心收集沉淀,分别用无水乙醇、丙酮反复洗涤沉淀,真空抽滤,冷冻干燥,得海带粗多糖。采用DEAE-52纤维素离子交换柱和SephadexG-200凝胶柱层析对海带多糖进行分离纯化Elo]
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