海带提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用.pdf

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1、第43卷第12期2013年12月中国海洋大学学报PERl0DICALOF0CEANUNIVERSITYOFCHINA43(12)：036～040Dec．，2013海带提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用+焉翠蔚，赵庆娅，张珞，常宝，杨志辉(中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003)摘要：为研究海带提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用，将海带经过烘干、粉碎、浸提、旋转蒸发后，再经乙酸乙酯萃取，得到水溶性组分和乙酸乙酯组分，减压浓缩、冷冻干燥得海带水溶性提取物和乙酸乙酯提取物，干粉得率分别为22．51％和1．23％，组间差异具有统计学意义(P

2、分光光度法研究2种提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。结果表明，0．8mg／mL的水溶性提取物和乙酸乙酯提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制率分别为51．62％和33．05％，其IC50分别为0．71和2．37mg／mL。选择抑制活性较强的水溶性提取物进行动力学分析，该提取物对黄嘌呤氧化酶表现为竞争性可逆抑制作用，抑制动力学常数K：一o．09mg／mL。关键词：海带提取物；黄嘌呤氧化酶；抑制作用中图法分类号：Q553文献标志码：A文章编号：1672—5174(2013)12—036—05黄嘌呤氧化酶(Xanthineoxidase，XOD)是一种黄素蛋白酶，存在于各种生物体中，在核酸代谢过程中起重要作用

3、，它能催化黄嘌呤和次黄嘌呤氧化生成尿酸，并产生过氧化物自由基。尿酸浓度过高会导致高尿酸血症，并引发痛风发作E1

4、。黄嘌呤氧化酶抑制剂作为一类抗痛风药物具有良好的发展前景，它通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，阻止黄嘌呤向尿酸的转化，从而减少体内尿酸的生成以达到治疗痛风的目的[2]。别嘌呤醇是该类药物的代表，然而，别嘌呤醇引发的过敏、肝肾损伤及骨髓抑制等毒副反应在一定程度上限制了其临床应用。因此，从天然生物中寻找安全无毒副作用的黄嘌呤氧化酶抑制剂一直是国内外学者关注的热点。目前，有关陆地植物提取物尤其是中药成分对黄嘌呤氧化酶抑制作用的研究较多E卜6

5、，而海藻提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用的研究较少。海

6、带(LaminariajaponicaAresch)又名昆布，是褐藻门，海带目，海带科，海带属的一种大型海藻，它含有胡萝卜素、维生素B1、维生素岛、蛋白质、大量碘等，具有极高的食用和药用价值E7。。本文研究了海带提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及其动力学特点，为开发海洋生物资源，寻找新型黄嘌呤氧化酶抑制剂提供了参考。1材料与方法1．1材料鲜海带，购于青岛市齐东路市场，将购买的新鲜海带用蒸馏水冲洗，去除表面的盐分、杂质及其他藻类，剪掉海带的黄白边梢，并将其剪成5cm见方的小块，60℃恒温干燥箱烘干至恒重，最后用料理机粉碎，过80目筛，放入密封袋内备用。1．2试剂和仪器黄嘌呤(Xanthine)

7、、黄嘌呤氧化酶(XanthineOxi—dase)、别嘌呤醇(Allopurin01)购于sigma公司；其它试剂均为国产分析纯，实验用水为双蒸水。FA2004上皿电子天平(上海精科天平)，EYELAN一1100型旋转蒸发仪(3a海爱朗仪器有限公司)，GA88一II超声波细胞粉碎机(无锡市上佳生物科技有限公司)，UnicWFZUV一2800AH紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)。1．3实验方法1．3．1海带提取物的制备称取10g海带干粉，以1：10的料液比，加入60％的乙醇溶液，经超声波破碎仪破碎5min，40℃水浴4h，离心过滤去除残渣，将所得乙醇提取液用旋转蒸发仪减压浓缩，然

8、后用乙酸乙酯萃取，分别将乙酸乙酯组分和水溶性组分减压浓缩、冷冻干燥，得海带乙酸乙酯提取物和水溶性提取物，分别将提取物配成100mg／mL溶液备用，再根据所需浓度进行稀释。1．3．2黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的测定黄嘌呤氧化酶的活力测定是基于黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm附近有特征吸收峰[4。5]。YnnC5H。N。02(黄嘌呤)+Oz+H20二当C5N。03Ht(尿酸)+H202。酶活力测定参考文献[6]的方法加以改进，先将浓度0．6mmol／L的黄嘌呤底物溶液2mL置于试管内，t基金项目：青岛市科技计划基础研究项目(11—2—4—1一(9)一gch)；国家大学生创新训练

9、项目(201210423045)资助收稿日期：2012—10—31；修订日期：2013—05—24作者简介：焉翠蔚(1963一)，女，教授。Email：cuiweiyan@OUC．edu．cn12期焉翠蔚，等：海带提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用加入0．2mol／L磷酸缓冲溶液(pH一7．5)2．8mL，25℃水浴10rain，再加入25℃预温的酶溶液(o．05U／mL)0．2mL，充分混匀，利用紫外分光光度计在波长200