植物提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶抑制作用研究

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1、分类号S68单位代码10447密级无研究生学号1210190201硕士学位论文论文题目植物提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶抑制作用研究研究生姓名徐广增专业名称风景园林学指导教师姓名王桂清、刘守柱学院农学院论文提交日期2015年6月原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，论文中不含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得聊城大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：日期导师签名：日期学位论文使用授

2、权声明本学位论文作者完全了解聊城大学有关保留、使用学位论文的规定，即：聊城大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权聊城大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名：日期导师签名：日期摘要酚氧化酶（phenoloxidase，PO）广泛存在于动物、植物、微生物等有机体内，是生物体内黑色素合成的关键酶。在昆虫的变态发育、免疫和防御系统中，酚氧化酶都起着重要的作用，因此可作为害虫控制的重要作用靶标。通过研究昆虫酚氧化酶的生物学特性，寻找有效的抑制剂，来筛

3、选合成新型的、有效的生物农药已成为昆虫酚氧化酶研究中的热点。本文以斜纹夜蛾（SpodopteralituraFabricius）幼虫的酚氧化酶为靶标，研究了酚氧化酶的酶学特性，5种植物不同溶剂提取物对酚氧化酶的体外抑制作用和臭椿水提取物、银杏乙醇提取物对斜纹夜蛾幼虫的生物活性。1.酚氧化酶的酶学特性以邻苯二酚为底物，研究了斜纹夜蛾幼虫酚氧化酶的酶学特性。结果表明：斜纹夜蛾幼虫酚氧化酶的最适pH在6.7~7.0之间，pH6.8时，稳定性最好；最适温度为30℃，20~35℃之间，稳定性较好；在3mL的测活体系中，当酶量为0.1mL时，酶促反应速度随底物浓度升高而增大，当底物浓度为

4、10mmol/L时，酶促反应最快，超过10mmol/L时，酶促反应趋于平衡；以邻苯二酚为底物时，斜纹夜蛾酚氧化酶的Km值为7.980mmol/L，Vm为204.082∆A/mg·10s。2.植物平行提取物对酚氧化酶的抑制作用采用酶标仪法测定了刚竹叶、银杏叶、接骨木叶、胡桃叶、臭椿叶和树皮提取物对斜纹夜蛾酚氧化酶活性的影响。结果表明：5种植物6种不同溶剂（极性大小：去离子水>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>石油醚）获得的提取物在一定浓度范围内均对PO表现为抑制作用，且随提取物浓度的升高，抑制作用有逐渐增强的趋势，但抑制效果存在较大的差异：臭椿叶片的水提取物、接骨木叶片的三氯甲烷提取

5、物、银杏叶片的乙醇提取物、刚竹叶片的丙酮提取物、和臭椿树皮的水提取物分别对PO的抑制效果最强，其IC50分别为：175、375、500、550和800mg/L；抑制动力学研究表明刚竹、银杏、臭椿3种植物提取物对PO表现为可逆抑制效应，且刚竹提取物为非竞争性抑制类型，其抑制常数Ki为158.2mg/L；而胡桃的提取物对PO的抑制作用较弱，且随提取物浓度的变化，抑制效果波动较大；接骨木提取物对PO表现为不可逆抑制效应。聊城大学硕士学位论文3.植物顺序提取物对酚氧化酶的抑制作用银杏叶片和臭椿叶片的顺序提取物对酚氧化酶的抑制效果均较平行提取物的抑制效果有所增强，银杏叶片和臭椿叶片乙醇

6、提取物的抑制作用增强最明显，IC50分别为400mg/L和375mg/L，抑制作用分别提高了20%和37.5%。4.银杏乙醇顺序提取物和臭椿水提取物的初纯化对银杏叶片乙醇提取物和臭椿水提取物进一步分离纯化后，发现银杏叶萃取物中三氯甲烷萃取物对酚氧化酶的抑制效果最显著，随萃取物浓度的增加，抑制效果呈直线上升，当萃取物浓度为200mg/L时，抑制效果为61.03%，比对照提高12.31%；臭椿水提取物中90%醇沉物对酚氧化酶的抑制效果最显著，当提取物浓度为200mg/L时，抑制率为57.32%，比对照增加49.35%，说明臭椿提取物中对酚氧化酶具抑制作用的成分主要是多糖类。5.银

7、杏叶片乙醇提取物和臭椿叶片水提取物对斜纹夜蛾幼虫的生物活性测定采用叶碟法测定了银杏叶片乙醇提取物和臭椿叶片水提取物对斜纹夜蛾幼虫的生物活性。结果表明：两种植物提取物对斜纹夜蛾幼虫均具有一定的胃毒和拒食作用，处理2d后32g/L银杏乙醇提取物和臭椿水提取物的拒食率分别为77.75%和89.30%，处理8d后32g/L提取物的校正死亡率分别为57.14%和43.14%。关键词：斜纹夜蛾；酚氧化酶；酶学特性；抑制作用；生物活性ii聊城大学硕士学位论文ABSTRACTPhenoloxidase(PO)iswid