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时间:2020-03-26
《产木聚糖酶的枯草杆菌筛选及稀土Er3﹢的诱变.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、化工设计通讯化工能源第42卷第10期ChemicalEngineeringDesignCommunicationsChemicalEnergy2016年10月3+产木聚糖酶的枯草杆菌筛选及稀土Er的诱变121111胡建华,杨志杰,潘丽珍,刘娜林,胡玥,薛利敏(1.内蒙古工业大学化工学院,内蒙古呼和浩特010051;2.内蒙古化工职业学院化学工程系,内蒙古呼和浩特010070)3+摘要:筛选了新的产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌,通过在对数期加入稀土Er进行诱变,发现稀土对枯草杆菌的生长没有-53+显著影响,对酶也没有直接影响,但是1×10mol/L的Er可以显著提高
2、木聚糖酶的酶活,酶活提高达102.2%,为木聚糖酶的诱变筛选提供新的方法。关键词:木聚糖酶;枯草杆菌;稀土;诱变中图分类号:TQ925文献标志码:A文章编号:1003–6490(2016)10–0103–02ScreeningofBacillusSubtilisProducingXylanase3+andmutagenesisofErHuJian-hua,YangZhi-jie,PanLi-zhen,LiuNa-lin,HuYue,XueLi-min3+Abstract:Anewxylanase-producingBacillussubtiliswasscr
3、eenedandmutagenizedbyadditionofErinthelogphase.Itwas3+foundthatrareearthdidnotsignificantlyaffectthegrowthofBacillussubtilisandtheenzymehadnodirectinfluence,/LofErcansignificantlyimprovetheenzymeactivityofxylanase,enzymeactivityincreasedto102.2%,forthemutagenesisofxylanasescreening
4、toprovideanewmethod.Keywords:xylanase;bacillussubtilis;rareearth;mutagenesis木聚糖是植物半纤维素的主要成分,含量仅次于纤维素的木聚糖酶的菌株,5%的接种量,装液量为50mL(250mL三[1]可再生多糖资源。木聚糖酶以内切方式水解木聚糖中的β-1,角瓶)在36℃、160r/min培养条件下摇床培养。培养8h后加-3-4-5-64糖苷键,这一作用既可降低木聚糖的粘性和抗营养性,又可入1×10mol/L、1×10mol/L、1×10mol/L、1×10mol/L的产生具保健和调节胃肠功能
5、的低聚木糖,因而有广泛的应用稀土ErCl3水溶液时,以不加稀土的菌液作为对照组,于36℃、前景。通过筛选新的高产菌株以及通过诱变等方法获得高酶160r/min培养,间隔一定时间取样测OD600,72h后停止培养。[2]活菌株,对于降低生产成本,提高生产效率都有重要的意义。将菌液以6000r/min离心5min,取上清液即为粗酶液,测定木稀土具有优良的生物学特性,适宜的稀土可以促进微生物的聚糖酶活性,每组三个平行样。[3]3+生长及产酶的提高,而高浓度的稀土则有抑制作用。本文筛1.2.3Er对木聚糖酶的直接作用选新的产木聚糖酶的菌株,通过稀土诱变提高木聚糖酶的
6、酶在对照组的粗酶液中直接加入相同浓度的ErCl3水溶液,活,为深入研究稀土促进木聚糖酶的机理奠定基础。静置2h,测定酶活。1材料和方法1.3木聚糖酶酶活的测定1.1材料以0.5%的木聚糖为底物溶液(pH为6.0),加入待测酶液1.1.1菌种来源在50℃反应30min后,加入DNS试剂沸水浴中保温显色5min取自呼和浩特郊区的土壤中。后,540nm的波长下测其吸光度(OD=)值。酶活定义:1mL1.1.2培养基粗酶液在pH为6.0、50℃下每分钟分解木聚糖产生1μg木糖筛选培养基为加入0.5%木聚糖的LB固体培养基。发酵为一个酶活单位。培养基为0.5%木聚糖L
7、B液体培养基。2结果与讨论1.1.3木聚糖的提取2.1产木聚糖酶的枯草杆菌的筛选将玉米芯粉碎后用4%NaOH室温浸泡过夜,抽滤取滤液,筛选有木聚糖透明圈的菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌,命用HCl调至pH为4.5,加等体积乙醇,离心得沉淀,于45℃名为BacillussubtilisQSH4。枯草杆菌是目前应用较多潜力较下烘干备用。大的一族革兰氏阳性细菌,可以分泌多种有用产物,在工业1.1.4试剂上长期被用于生产蛋白酶及淀粉酶等。3+所用试剂皆为化学纯或生物纯。所用稀土ErCl3为自备,2.2Er对生长的影响将稀土Er2O3与1∶1的盐酸按摩尔比1∶6混合,搅拌使
8、其溶加入稀土离子后对枯草杆菌的生长曲线见图1。从图1
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