产木聚糖酶的枯草杆菌筛选及稀土Er3﹢的诱变.pdf

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1、化工设计通讯化工能源第42卷第10期ChemicalEngineeringDesignCommunicationsChemicalEnergy2016年10月3+产木聚糖酶的枯草杆菌筛选及稀土Er的诱变121111胡建华，杨志杰，潘丽珍，刘娜林，胡玥，薛利敏（1.内蒙古工业大学化工学院，内蒙古呼和浩特010051；2.内蒙古化工职业学院化学工程系，内蒙古呼和浩特010070）3+摘要：筛选了新的产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌，通过在对数期加入稀土Er进行诱变，发现稀土对枯草杆菌的生长没有-53+显著影响，对酶也没有直接影响，但是1×10mol/L的Er可以显著提高

2、木聚糖酶的酶活，酶活提高达102.2%，为木聚糖酶的诱变筛选提供新的方法。关键词：木聚糖酶；枯草杆菌；稀土；诱变中图分类号：TQ925文献标志码：A文章编号：1003–6490（2016）10–0103–02ScreeningofBacillusSubtilisProducingXylanase3+andmutagenesisofErHuJian-hua，YangZhi-jie，PanLi-zhen，LiuNa-lin，HuYue，XueLi-min3+Abstract：Anewxylanase-producingBacillussubtiliswasscr

3、eenedandmutagenizedbyadditionofErinthelogphase.Itwas3+foundthatrareearthdidnotsignificantlyaffectthegrowthofBacillussubtilisandtheenzymehadnodirectinfluence，/LofErcansignificantlyimprovetheenzymeactivityofxylanase，enzymeactivityincreasedto102.2%，forthemutagenesisofxylanasescreening

4、toprovideanewmethod.Keywords：xylanase；bacillussubtilis；rareearth；mutagenesis木聚糖是植物半纤维素的主要成分，含量仅次于纤维素的木聚糖酶的菌株，5%的接种量，装液量为50mL（250mL三[1]可再生多糖资源。木聚糖酶以内切方式水解木聚糖中的β-1，角瓶）在36℃、160r/min培养条件下摇床培养。培养8h后加-3-4-5-64糖苷键，这一作用既可降低木聚糖的粘性和抗营养性，又可入1×10mol/L、1×10mol/L、1×10mol/L、1×10mol/L的产生具保健和调节胃肠功能

5、的低聚木糖，因而有广泛的应用稀土ErCl3水溶液时，以不加稀土的菌液作为对照组，于36℃、前景。通过筛选新的高产菌株以及通过诱变等方法获得高酶160r/min培养，间隔一定时间取样测OD600，72h后停止培养。[2]活菌株，对于降低生产成本，提高生产效率都有重要的意义。将菌液以6000r/min离心5min，取上清液即为粗酶液，测定木稀土具有优良的生物学特性，适宜的稀土可以促进微生物的聚糖酶活性，每组三个平行样。[3]3+生长及产酶的提高，而高浓度的稀土则有抑制作用。本文筛1.2.3Er对木聚糖酶的直接作用选新的产木聚糖酶的菌株，通过稀土诱变提高木聚糖酶的

6、酶在对照组的粗酶液中直接加入相同浓度的ErCl3水溶液，活，为深入研究稀土促进木聚糖酶的机理奠定基础。静置2h，测定酶活。1材料和方法1.3木聚糖酶酶活的测定1.1材料以0.5％的木聚糖为底物溶液（pH为6.0），加入待测酶液1.1.1菌种来源在50℃反应30min后，加入DNS试剂沸水浴中保温显色5min取自呼和浩特郊区的土壤中。后，540nm的波长下测其吸光度（OD=）值。酶活定义：1mL1.1.2培养基粗酶液在pH为6.0、50℃下每分钟分解木聚糖产生1μg木糖筛选培养基为加入0.5％木聚糖的LB固体培养基。发酵为一个酶活单位。培养基为0.5％木聚糖L

7、B液体培养基。2结果与讨论1.1.3木聚糖的提取2.1产木聚糖酶的枯草杆菌的筛选将玉米芯粉碎后用4%NaOH室温浸泡过夜，抽滤取滤液，筛选有木聚糖透明圈的菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌，命用HCl调至pH为4.5，加等体积乙醇，离心得沉淀，于45℃名为BacillussubtilisQSH4。枯草杆菌是目前应用较多潜力较下烘干备用。大的一族革兰氏阳性细菌，可以分泌多种有用产物，在工业1.1.4试剂上长期被用于生产蛋白酶及淀粉酶等。3+所用试剂皆为化学纯或生物纯。所用稀土ErCl3为自备，2.2Er对生长的影响将稀土Er2O3与1∶1的盐酸按摩尔比1∶6混合，搅拌使

8、其溶加入稀土离子后对枯草杆菌的生长曲线见图1。从图1