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1、分类号S566.3学校代码10129UDC581学号08202001农杆菌介导AVP1基因转化甜菜的研究TheStadyonAgrobacterium-mediatedTransformationof+SugarBeet(Betavulgaris)withVacuolarH-PPase(AVP1)Gene申请人：王晓娇学科门类：理学学科专业：植物学研究方向：作物生理与分子生物学指导教师：张少英教授论文提交日期：二○一一年五月摘要甜菜是我国重要的两大糖料作物之一，并且在发展我国制糖业以满足日益增长的食糖需求中将起到重要作用。但最近
2、几十年里，受自然灾害和人为因素的影响，一些不利于植物生存的因素不断产生，比如干旱、盐碱化、低温、洪涝以及土壤贫瘠等。在扩大甜菜生产规模上，土壤干旱、盐碱化、贫瘠将成为制约产量的主要环境因子，提高甜菜抗逆性是目前和将来促进甜菜生产持续发展的重要基础。实验证明，液泡膜+H-PPase(AVP1)基因的超表达能显著提高转基因植物的抗旱性、耐盐性和耐土壤贫瘠性，为培育出抗旱、耐盐碱、耐贫瘠、优质、高产、高糖的甜菜新品系提供了方法和思路。本研究首次利用农杆菌介导法将AVP1基因转入甜菜，并优化了一套高效、稳定的遗传转化体系，运用了PCR方
3、法检测外源基因已转入甜菜中，获得转基因植株。同时，对转基因植株进行了干旱胁迫处理和生理特性鉴定。研究结果如下：1.甜菜无菌苗获得方法：先用砂纸把种壳磨光，再利用浓硫酸、10%NaClO、0.1%HgCl2各浸泡10min，期间用无菌水进行多次冲洗，污染率仅为3.3%，发芽率为98.9%。新方法具有节省时间，节约种子的优点，为开展甜菜基因工程奠定了基础。2.优化了甜菜遗传转化体系：子叶节预培养24h、菌液浓度光密度值0.4-0.5、侵染时间6-8min、共培养时间36-48h、Cef500mg/L和Kan100mg/L的优化遗传转
4、化体系。3.实现了AVP1基因对甜菜的遗传转化，共获得抗性苗72株，PCR检测获得转基因植株37株，转化率为11.31%。4.对部分转基因株系进行干旱胁迫处理，测定非转基因植株和转基因植株叶和根中相对含水量、游离脯氨酸、丙二醛（MDA）含量的变化，初步证明转AVP1基因提高了转基因植株的抗旱性。+关键词：甜菜；液泡膜H-PPase；农杆菌介导；遗传转化；抗旱性TheStadyonAgrobacterium-mediatedTransformationof+SugarBeet(Betavulgaris)withVacuolarH-
5、PPase(AVP1)GeneAbstractSugarbeetisoneoftheimportantsugarcropsinourcountry,anditwillplayanimportantroleindevelopingthesugarindustrytomeetrisingdemand.Butoverthepast10years,someunfavorabletoplantsurvivalfactorshasemergedbynaturaldisastersandhumanfactors,suchasdrought,s
6、alinization,flood,lowtemperatureandbarren,etc.Inexpandedbeetproductionscale,soildrought,salinization,barrenwillbecomethemainenvironmentalfactorofrestrictingoutput,Enhanceanti-reversibilityissustaineddevelopmentimportantbasisofproductionpromotioninthecurrentandfuture.
7、Mostexperimentsshowthat,AVP1geneover-expressioncouldimprovedroughttolerance,salttoleranceandbarrentoleranceoftransgenicplants,itisprovidingthemethodandthinkingforproductionofdroughttolerance,salttolerance,barrentolerance,highquality,highyield,highsugarbeetnewstrains.
8、Inthisstudy,AVP1genewassuccessfullytransformedintotheexplantsofcotyledonnode.byusingAgrobacterium-mediatedtransformationmethord,and
