农杆菌介导美味猕猴桃基因转化影响因素研究.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhureISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．4．551农杆菌介导美味猕猴桃基因转化影响因素研究陆荣生，霍秀娟，杜晓莉，韩美丽+，杨玉霞，马跃峰，覃建林(广西农业科学院植物保护研究所／广西作物病虫害生物学重点实验室，南宁530007)摘要：【目的】建立美味猕猴桃叶片外植体转化体系，为猕猴桃遗传转化研究奠定良好基础。【方法】以美味猕猴桃组培苗叶片为材料，研究不同浓度乙酰香酮(As)对外植体B一葡萄糖苷酸酶基因(GUS)瞬时表达阳性率的影响，及暗培养时间

2、与抗褐化剂二硫苏糖醇(DTT)、聚乙烯呲咯烷酮(PVP)对外植体褐化、抗性芽诱导的影响。【结果】仅在侵染菌液中添JXIAS时，100、150、200IxmoFLAS3个处理的外植体GUSJjH性率均极显著高于对照，分别为14．6％、16．7％、10．7％；而当农杆菌侵染液与共培养基中同时添3口100～150IxmoFLAS，可使GUS瞬时表达阳性率提高至37．9％。选择培养初期经过2～12d暗培养后，外植体褐化率不断下降，抗性芽诱导率不同程度提高，其中以暗培养6、8d处理的褐化率相对较低，分别为33．2％和30．6％，且相应的抗性芽诱导率最高，分别为14．2％和13．1％，极显著高于其

3、他处理与对照。在分化培养基中添加1．o~2．0∥L的DTT并暗培养6d的效果优于对应浓度的PVP；其中1．5g／LDTT并暗培养6d，可使外植体褐化率降至13．4％，卡那霉素抗性芽诱导率提高至24．3％。卡那霉素抗性植株叶片G聊藻色与PCR扩增结果显示，ShivaA基因已转化至美味猕猴桃秦美。【结论】AS不同使用方式及其浓度对叶片GUS瞬时阳性表达率的提高具有明显影响；选择培养初期进行暗培养6～8d或暗培养结合添加1．o～2．0g／LDTT抗褐化剂，均可降低美味猕猴桃叶片转化芽再生过程中的褐化，提高转化效率。关键词：美味猕猴桃；外植体；褐化；鼬ivaA基因；转化效率中图分类号：$663

4、．4文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)04—0551-07InfluencingfactorsonAgrobacterium-mediatedgenetransformationofActinidiadelidOtISCVQinmeiLURong-sheng，HUOXiu-juan，DUXiao-li，HANMei-li+，YANGYu-xia，MAYue-feng，QINJian-lin(PlantProtectionResearchInstitute，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences／GuangxiKeyLaboratmT

5、ofBiologyforCropDiseasesandInsectPests，Nanning530007，China)Abstract：【Objective】Transfomlationsystemofleavesfi'OIllAcffnidiadeliciousevQinmeiplantletswasestablishedtoprovideusetulretereneesforkiwigenetransforelation．【Method]Youngleavesofplantletswereusedasexplantstoinvestigateefleetsofdiflerentco

6、ncentrationsofASontransientexpressionpositiverateofGUSandetteetsofdarkculturedurationandanti—browningagentofDTTandPVPonexplantbrowningandresistantbudinduction．【Result]GUStransientexpressionrateofexplantsunder100，150and200]llno儿ASwassignificantlyhigherthanthatoftheeontrol，whichwas14．6％，16．7％and10

7、．7％．respectively．GUStransientpositiveexpressionrateinereasedto37．9％adding100—150]llnol几ASinA簿'obacteriuminfeetionfluidandco-cultivationmediunl．After2—12ddarkcultureininitialcultureperiod．explantbrowningrateeontinu—ouslydropp