酒曲糖化酶活力的测定.doc

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1、酒曲糖化酶活力测定的实验方案一、实验原理固体曲中糖化酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）能将淀粉水解为葡萄糖，进而被微生物发酵，生产酒精。糖化酶活力高，淀粉利用率就高。可溶性淀粉经糖化酶催化水解产生葡萄糖，用斐林试剂法测定。二、仪器试剂⒈仪器:烧杯，量筒，容量瓶，250ml锥形瓶，碱式滴定管，试剂瓶，移液管⒉试剂：（1）20g/L可溶性淀粉溶液：准确称取绝干计的可溶性淀粉2g（准确至0.001g），于50mL烧杯中，用少量水调匀后，倒入盛有70mL沸水的烧杯中，并用20mL水分次洗涤小烧杯，洗液合并其中，用微火煮沸到透明，冷却后用水定容至100mL，当天配置使用。（2）1g/L葡萄糖标准

2、溶液：准确称取预先在100~105℃烘干的无水葡萄糖1g(准确至0.0001g)溶解于水，加5mL浓盐酸，用水定容至1L。（3）斐林试剂A.甲液：称取15g硫酸铜（）0.05g亚甲基蓝，溶于水并稀释至1L。B.乙液：称取酒石酸钾钠，54gNaOH，4g亚铁氯化钾溶于水并稀释至1L。（4）乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH4.6）a.2mol/L乙酸溶液：取118mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。B.2mol/L乙酸钠溶液：称取272g乙酸钠（CH3COOH·3H2O），溶于水并稀释至1000mL。将a，b等体积混合，即为pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液。（5）0.5mol/LH2SO3溶液：

3、量取28.3mL浓硫酸，缓慢倒入水中并稀释至1L。（6）1mol/LNaOH溶液。三.测定步骤（1）5%干曲浸出液制备称取相当于5g的干曲的曲粉（准确至0.01g）［曲粉量（g）=5×1/（1－水分含量）］，置于250mL烧杯中，加水（90－5×水分%）mL，缓冲液10mL，在30℃水浴中浸出1h，每隔15min搅拌1次。然后用干滤纸过滤，弃去最初5mL，接收50mL澄清滤液备用。（2）糖化液制备吸取20g/L可溶性淀粉溶液50mL于100mL容量瓶中，在35℃水浴保温20min后，准确加入酶浸出液10mL，摇匀并立即计时，在35℃水浴中准确保温1h。立即加入3mL1mol/LNaO

4、H溶液，以停止反应。再冷却到室温，用水定容至刻度线。此时溶液应呈碱性。空白液制备：吸取20g/L可溶性淀粉溶液50mL于100mL容量瓶中，在35℃水浴保温20min后，先加入3mL1mol/LNaOH溶液，再准确加入酶浸出液10mL，摇匀并立即计时，在35℃水浴中准确保温1h。冷却到室温，定容。此时溶液应呈碱性。（3）糖分测定斐林试剂法，先取适量糖化液于斐林试剂中，用标准葡萄糖溶液滴定。四数据记录与结果计算糖化酶活力定义：1g干曲在35℃、pH4.6条件下，反应1h，将可溶性淀粉分解为葡萄糖1mg所需的酶量称为1个酶活单位（U/g）。糖化酶活力（U/g）=1.斐林试剂的标定平行测定

5、次数123斐林试剂的体积10.0010.0010.00消耗葡萄糖标准溶液体积15.4015.5615.36葡萄糖标准溶液浓度0.090080.089150.09031斐林试剂的浓度1.3871.3871.387斐林试剂平均浓度1.3872.糖化酶活力测定平行测定次数123斐林试剂的体积10.0010.0010.00加入糖化液体的体积5.005.005.00消耗葡萄糖标准溶液体积7.127.367.46葡萄糖标准溶液浓度0.00019240.00018850.0001859斐林试剂的浓度49.5647.2744.84斐林试剂平均浓度47.22五实验结论与总结：1、实验结论：本次试验失败

6、，通过计算得到，菲林试剂的浓度值是一样的，查国标得到计算的糖化酶活力偏低，所以实验失败。2、实验总结：1.称量药品时操作不规范，误差较大。2.移取药品时取用不同的移液管导致缓冲溶液瘦污染，浓度降低。3.在滴定时候忘记加入指示剂。4.在水浴中保温时间没到到。