麸曲糖化酶活力测定方法探讨-论文.pdf

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1、第27卷第3期四川理工学院学报(自然科学版)VoL27NO．32014年6月JournalofSichuanUniversityofScience＆Engineering(NaturalScienceEdition)Jun．2014文章编号：1673—1549(2014)03-0006-04DOI：10．11863／j．suse．2014．03．02麸曲糖化酶活力测定方法探讨罗惠波，王毅，边名鸿，杨晓东，杨建勤(1．四川理工学院生物工程学院，四川自贡643000；2．酿酒生物技术及应用四川省重点实验室，四川自贡643000；3．江安县工业园区管理委员会，四川江

2、安644200；4．成都新忆坊商贸有限公司，成都610036)摘要：糖化酶活力是制曲过程中的一个重要指标。建立了3，5一二硝基水杨酸(DNS)结合连续流动化学分析仪(API)检测麸曲糖化酶活力的方法。结果表明：通过t检验，次碘酸盐法、DNS法和DNS优化法测定糖化酶活力均无显著性系统误差，DNS优化法的误差值最低为13．1U／g，RSD值为1．97％。通过F一检验双样本方差分析，DNS优化法较快速滴定法、DNS法测定麸曲糖化酶活力的精密度均有显著性提高，且具有简便、快捷的特点。关键词：麸曲；连续流动化学分析仪(API)；3，5一二硝基水杨酸(DNS)；糖化酶中

3、图分类号：TQ925文献标志码：A糖化酶(Glucoamylase，EC3．2．1．3．)是一种外切型试剂：MgSO、KH2PO4、NaNO、醋酸、醋酸钠、葡萄糖苷酶，作为白酒微生物代谢过程主要代谢产物之一，糖、3，5一二硝基水杨酸(DNS)等均为分析纯，购于成都其活力大小是衡量麸曲质量的重要指标¨引。糖化酶能科龙化工试剂厂。按顺序水解淀粉或淀粉类似物非还原端的多种糖苷键仪器与设备：uV一2000紫外可见分光光度计(上海而生成葡萄糖，因此被广泛运用于食品工业中。常规尤尼柯有限公司)；连续流动化学分析仪(Micro—CFA)测定糖化酶活力方法有次碘酸盐法、Sch

4、oorl法(DU(美国AstoriaPacificInternationa1)；恒温水浴锅(北京中法)、快速滴定法和3，5一二硝基水杨酸(DNS)法等，但兴伟业仪器有限公司)；pH计(上海精密科学仪器有限各个测定方法均有一定的缺陷。公司)。本文采用微量连续流动分析仪对DNS法进行改进，1．2固态发酵培养利用导管取样，运用分光光度计的原理，通过电脑软件称取10g的麸皮，加水8％(v／m)，KH：PO0．02g，自动检测样品含量，并与次碘酸盐法、快速滴定法进MgSO40．02g，NNO0．3g，在250mL三角瓶中润料2h行比较，以期建立检测麸曲糖化酶活力准确、实

5、用、快后，121cI=灭菌30min，趁热摇散，冷却至40℃左右，接速、简便的新方法，并为麸曲生产的规范化提供数据与入0．3％(m／m)麸曲，混合均匀，于温度30℃、湿度理论支持，更好的指导麸曲生产。95％，培养48h⋯(22h时进行扣瓶)。1．3粗酶液的制备l材料和方法发酵结束后，加入4o℃水170mL。然后加入20mL1．1材料与仪器pH4．6的醋酸一醋酸钠缓冲溶液，搅匀，40℃保温浸泡材料：麸曲，由酿酒生物技术及应用四川省重点实1h，保温时每隔10min搅拌1次。用脱脂棉过滤，弃去验室提供；糖化酶(酶活力100000U／g)，上海蓝季科技初滤液，得澄清滤

6、液待用(滤液应尽快分析，若30rain发展有限公司。内不能使用，应将滤液暂置冰箱中冷藏，分析时升温至收稿日期：2014-01-03基金项目：酿酒生物技术及应用四川省重点实验室开放基金项目(NJ2010-05；NJ2011-05；NJ2013-03)作者简介：罗惠波(1969一)，男，四川自贡人，教授，主要从事酒类发酵方面的研究，(E-mail)1036884458@qq．corn笙查兰塑罗惠波等：麸曲糖化酶活力测定方法探讨740℃后使用)。验分析结果见表2。1．4检测方法表2不同方法测定糖化酶活力分析1．4．1酶活力测定方法次碘酸盐测定糖化酶活力J。快速滴定法

7、测定糖化酶活力。3，5一二硝基水杨酸法测定糖化酶活力J。1．4．2连续流动化学分析仪检测在传统3，5一二硝基水杨酸(DNS)法的基础上，结合美国(API)连续流动化学分析仪，对麸曲糖化酶和标准糖化酶活力进行测定(图1)。由表2可知，采用不同方法测定糖化酶活力其准确度有较大的差异。通过误差和均值分析可知，次碘酸盐的差值最小，说明次碘酸盐有较高的准确度；而DNS法的差值最大，准确度最低。从RSD值也可以看出，次碘酸盐法的图1糖化酶活力测定连接示意图RSD值为3．6％，较快速滴定法和DNS法准确度高。1．4．3葡萄糖标准曲线测定通过t检验，采用次碘酸盐法和DNS法测

8、定糖化酶浓缩标准液(10L)：称取1g