甜酒曲中根霉糖化酶菌株的紫外诱变选育-综

《甜酒曲中根霉糖化酶菌株的紫外诱变选育-综》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、甜酒曲中根霉糖化酶菌株的紫外诱变选育实验名称：实验一﹑工业微生物菌种分离一，实验目的：1﹑加深对发酵工程上游技术中菌种筛选的认识；2﹑学会常规选种方法；3﹑树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。二，实验内容：甜酒曲中根霉糖化酶菌株的分离纯化三，实验原理：根霉能产糖化酶，脂肪酶，血纤维蛋白溶解酶等酶系。甜酒曲主要用于制作甜酒酿，在甜酒酿制作过程中，甜酒曲是主要的发酵制剂。甜酒曲是糖化菌及酵母制剂，其所含的微生物主要有根霉、毛霉及少量酵母。根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的

2、孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存，能长期保持生活力。菌落疏松或稠密，最初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行，无色。假根发达，分枝呈指状或根状，呈褐色。孢囊梗直立或稍弯曲，2－4株成束，与假根对生，有时膨大或分枝，呈褐色，长210－2500μm，直径5－18μm,囊轴呈球形或近球形或卵圆形，呈淡褐色，直径30－200μm．囊托呈楔型。孢子囊呈球形或近球形，老后呈黑色，直径60－250μm．抱囊抱子呈椭圆形、球形或其他形，呈黄灰色，直径5－

3、8μm．有厚垣饱子，其形状、大小不一致，未见接合抱子。该菌于37－40℃能生长。可采用稀释涂布法和平板画线法进行分离。稀释涂布法原理：稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。平板画线分离法原理：平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表点击此处添加图片说明面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当

4、作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。四，实验步骤：马铃薯蔗糖培养基的制备马铃薯200g蔗糖20g自来水1000mL琼脂20gpH自然（约6.0）马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，用纱布过滤，滤液加糖加琼脂，溶化后补足水至1000ml，装入三角瓶。培养基凝固前，在无菌条件下，倒装于9个无菌培养皿中，制成平板培养基。2.无菌器材的准备各种类型的移液管若干；{第一轮需要7支1ml移液管（至少），1支10ml移液管，}普通培养皿若

5、干；{第一论需要9个培养皿；第二轮需要3个培养皿（配置培养基）}无菌生理盐水若干；（氯化钠8.5g；蒸馏水1000ml；121℃高压灭菌15min）试管；{第一轮需要6支试管；第三轮（约4天）天后需要3支试管用于斜面接种培养（配置培养基）}锥形瓶。3.菌悬液的制备准确称取1.0000g甜酒曲于装有9ml无菌生理盐水的锥形瓶中，盖上瓶塞，轻轻摇匀，备用。（1ml移液管1支，装有9ml无菌生理盐水的试管1支）4.稀释将制得菌悬液，以10倍梯度稀释，依次得到~各个稀释度的菌悬液。（需要1ml移液管5支，5支装有9ml无菌生理盐水的试管，1支10ml的移液管）

6、5.稀释涂布接种培养在培养基中加入0.1%去氧胆酸钠溶液，以抑制根霉的过快生长。选取~,3个稀释度的菌悬液进行接种，用涂布平板法进行接种。在无菌操作条件下从~的稀释液中各取出各0.2mL涂布于马铃薯培养基的培养皿中，每个稀释度接种3个培养皿。贴好标签，将接种好的培养基在30℃培养2d。（需要9个无菌培养皿，前面用过的2支移液管可以重复用，还需额外1支无菌移液管）6.初步鉴定培养结束后，进行菌落观察和显微镜检，根据菌落形态和个体形态来识别根霉。菌落形态：菌落的大小，菌丝的高矮，生长密度，孢子颜色以及菌落表面。个体形态：制水浸片观察。制水浸片观察：于洁净的

7、载片中央，滴加一小滴乳酸石炭酸溶液，然后用接种针从菌落边缘挑取少许菌丝体置于其中，使其摊开，轻轻盖上盖片（注意勿出现气泡），置于10×10倍数下观察。观察菌丝是否有横隔，假根，匍匐枝，孢子囊梗，孢子梗及胞囊胞子。7.平板画线接种培养在步骤6的培养皿中，找到长势最好的3个目标菌落，用接种环在挑取菌落生长形态良好，菌落颜色为白色的根霉，在无菌操作条件下，用接种环在已配置并灭菌过的培养基上进行划线，运用平板划线分离法对根霉进行接种。每个目标菌落平板画线3个平板，贴好标签，将接种好的培养基在30℃培养2d。（需要3个培养皿）8.初步鉴定糖化力用碘液在步骤7中培

8、养后的培养基上进行涂抹，根据菌落周围是否出现透明圈来区别产酶菌株。根据HE值大小来初步判断糖化