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1、JournalofMathematicalMedicineVol.23No.22010文章编号:10044337(2010)02019404中图分类号:R9446文献标识码:A药学研究响应面分析法优化小鱼仙草总黄酮的提取工艺研究严云良吕佩惠余陈欢(浙江中医药大学杭州310053)摘要:目的:确定小鱼仙草总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:以乙醇回流提取法提取小鱼仙草总黄酮,采用分光光度法测定总黄酮的含量,以总黄酮提取得率为考察指标,考察溶媒倍数、提取时间和提取次数等因素对小鱼仙草总黄酮提取得率的影响,利
2、用响应面分析法优化提取工艺,确定总黄酮的最佳提取工艺。结果:小鱼仙草总黄酮的最佳提取工艺为:加药材20倍量浓度为70%乙醇,于90!水浴回流提取3次,每次1.9h。此工艺下小鱼仙草总黄酮的提取得率达8.50%。结论:该工艺提取得率高、操作简便,易于工业化大生产。关键词:小鱼仙草;黄酮;响应面分析法doi:10.3969/j.issn.10044337.2010.02.030小鱼仙草为唇形科石荠苧属一年生草本植物Mosladian精密称取105!干燥恒重的芦丁对照品10.6mg,加50thera的全草,别名疏花荠苧、野香薷等。具有祛
3、风发表、利湿%乙醇溶解定容于50mL容量瓶,得浓度为2.12mgomL-1标止痒之功效,主治感冒发热、扁桃体炎、中暑头痛、溃疡病准品溶液。精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0等[1]。有关小鱼仙草挥发油的研究报道较多,其挥发油主要ml,分别置25ml容量瓶中,加5%NaNO21.0mL,摇匀,放含有香荆芥酚、百里香酚、芳香醇和丁香烯等成分,具有较好置6min后加10%Al(NO3)31.0mL,摇匀,放置6min后[2]的抑菌作用;而对小鱼仙草非挥发性部位的研究报道较少。再加10%NaOH10mL,加50%乙醇稀释至
4、25ml,混匀,静现代研究表明,其非挥发性部位主要含有黄酮、酚酸等成分,置15min,同行试剂作空白,于510nm处测定吸光度[10],以吸具有抗菌、抗氧化、抗变态反应等作用[3,4]。目前关于小鱼仙光度值为纵坐标,以芦丁浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回草总黄酮提取工艺优化方面的研究少见报道。仅刘小芬等[5]归方程:A=0.5464C+0.0056,r=0.9997,结果表明芦丁对小鱼仙草总黄酮的提取工艺作了单因素考察,缺乏多因素在0.212~1.272mg范围内线性关系良好。间的交互作用分析,具有一定的局限性。而响应面分析法22提取工艺研
5、究(Responsesurfaceanalysismethodology,RSM)是目前比较通根据BoxBenhnken的中心组合实验设计原理,综合单因用的设计分析方法,它通过多元二次回归方程拟合多因子实素实验结果,在选定乙醇浓度为70%、提取温度为90!的前验中多个因子与响应值间的关系,通过对方程求极值的方法提下,选择溶媒倍数、提取时间和提取次数3个因素作为自变[6~9]达到参数优化的目的。本研究在前期单因素实验的基础量设计响应面分析实验,分别以X1、X2、X3表示,每个自变量上,采用响应面分析法,根据BoxBehnken组合设计原理,考
6、的低、中、高水平分别以-1、0、1进行编码,以小鱼仙草总黄酮察了影响小鱼仙草总黄酮回流提取效果的主要因素,确定了提取得率作为响应值Y。实验因素及水平安排见表1。其最佳提取工艺条件,为更好地开发以小鱼仙草总黄酮为主的药物及其制剂提供了实验参考。表1实验因素及水平安排表1仪器与试药因素/水平-101X1/溶媒倍数203040WND200A型高速中药粉碎机(上海微型电机厂)、X2/提取时间11.52S22PC可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)。小鱼仙草X3/提取次数123药材于2008年10月采自浙江永康,经俞冰副教授鉴定为小分别精确称
7、取小鱼仙草干燥药材粉末5.0g,根据表1选鱼仙草MosladiantheraMaxim.的地上部分,阴干,粉碎,备择的因素和水平,70%乙醇回流提取,过滤,加同浓度的乙醇用。芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所(批号:10008020030),所用试剂均为分析纯。溶液定容至250mL,摇匀,作为供试品溶液。精密移取0.3mL供试品溶液,测定总黄酮含量,计算总黄酮提取得率,结果2实验方法与结果见表2。21总黄酮的含量测定收稿日期:20091117基金项目:浙江省自然科学基金(NO.Y2080313)194数理医药学杂志2010年
8、第23卷第2期果,确定最佳回流提取工艺为:加药材20倍量浓度为70%乙表2响应面实验安排及结果(n=3)醇,于90!水浴回流提取3次,每次1.9h。
