响应面法优化广枣总黄酮的超声提取工艺研究

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1、响应面法优化广枣总黄酮的超声提取工艺研究摘要：采用响应面法超声提取广枣［Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetH川］中总黄酮，在单因素试验基础上，利用Design-Expert8.0、5.0软件设计响应面试验，研究乙醇溶液体积分数、液料比、超声时间和超声温度对总黄酮提取率的影响。结果表明，广枣中总黄酮的最佳超声提取工艺参数乙醇溶液体积分数为62%，超声提取时间为55min，液料比为35.00:1(V:m),在此试验条件下广枣总黄酮平均提取率为3.472%。关键词：广枣［Choerospondias

2、axNlaris(Roxb.)BurttetHill］；总黄酮;超声提取；响应面法中图分类号：S665.1文献标识码：A文章编号:0439-8114(2015)09-2210-04广枣为漆树科植物南酸枣［Choerospondiasaxillaris(Roxb.)BurttetHill］的干燥成熟果实，又名五眼果、酸枣、山枣子等，是蒙古族常用药材［1］。广枣性味甘、酸，具有行气活血、养心安神的功能，用于气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不安等病症的治疗。广枣中的化学成分包括黄酮、有机酸、甾醇、香豆素、挥发油、酚酸类、多糖、氨基酸及多

3、种无机元素等［2］。广枣中的总黄酮是其有效成分，具有多种生理活性作用。目前，广枣中黄酮类化合物的提取方法主要有醇提热回流法［3-5］、醇提渗漉法［6］及水煮提取法［7］等，且大多采用正交设计法研究其提取工艺。本研究在单因素试验的基础上，使用响应面分析法［8,9］优化广枣中总黄酮的提取工艺，旨在为广枣的进一步研究开发提供科学依据和参考。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器广枣药材（毫州市中药饮片厂，批号130426），经赣南医学院药学院中药鉴定教研室程齐来教授鉴定。芦丁标准品（A0103,含量彡98%，北京恒元启天化工技术研宄院）；无水

4、乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。PELambda35UV/VIS型紫外可见分光光度计（美国珀金埃尔默公司）；FW135型手提中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；H2002型分析天平（上海精天电子仪器公司）;EYELAN-1001型旋转蒸发仪（日本东京理化器械）；EYELAA-1000S型水式真空泵（上海爱明仪器有限公司）；202A-2型电热干燥箱（上海阳光试验仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1.2试验方法1.2.1标准曲线的绘制精确称取11.15mg芦丁标准品，用60%乙醇溶液溶解

5、，定容于100mL容量瓶中，摇匀，得到111.5mg八的芦丁标准溶液。精确量取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分别置于10.0mL容量瓶中。依次分别加入60%乙醇溶液稀释至5.0mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，静置5min再加入0.3mL的10%硝酸铝溶液，迅速摇匀，静置6min,最后加入4mL4%氢氧化钠溶液，混匀，用60%乙醇溶液稀释至刻度，充分摇匀。放置15min后，以不加芦丁的试剂作空白对照，测定波长为509nm时的吸光度，得到吸光度（Y）与芦丁溶液浓度（X）的回归方程为Y=0.011

6、3X-0.0017,R2=0.9997o1.2.2广枣总黄酮的超声提取将广枣50°C恒温烘干后粉碎过40目筛，称取0.5g，加入60%乙醇溶液15mL，浸泡15min后，在70°C下超声50min，抽滤。待样品冷却到室温后再重复处理1次。合并滤液，用旋转蒸发仪回收溶剂，浓缩后用60%乙醇溶液定容于50mL容量瓶中备用。1.2.3总黄酮含量的测定吸取ImL滤液于10mL容量瓶中，按标准曲线的测定方法测定其吸光度，计算总黄酮含量和提取率。1.2.4单因素试验①乙醇溶液体积分数。分析不同乙醇体积分数（40%、50%>60%、70%、80%

7、）对广枣总黄酮提取率的影响；②液料比。分析不同液料比（10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40：1,mL：g）对广枣总黄酮提取率的影响；③超声时间。分析不同超声时间（20、30、40、50、60、70min）对广枣总黄酮提取率的影响；④超声温度。分析不同超声温度（40、45、50、60、70°C）对广枣总黄酮提取率的影响。1.2.5响应面试验设计根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，综合单因素试验结果，选取乙醇溶液体积分数（A）、超声时间（B）、料液比（C）3个对总黄酮提取率影响较大的因素，对提取工

8、艺条件进行响应面分析，试验因素及水平见表1。1.2.6验证试验对Box-Behnken中心组合试验优化后的广枣总黄酮提取工艺进行验证试验，重复3次。2结果与分析2.1单因素试验结果2.1.1乙醇溶液体积分数对广枣总黄酮提取率的影响由图