响应面分析法优化小鱼仙草总黄酮的提取工艺研究论文

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1、响应面分析法优化小鱼仙草总黄酮的提取工艺研究论文严云良吕佩惠余陈欢【摘要】目的：确定小鱼仙草总黄酮的最佳提取工艺条件。方法：以乙醇回流提取法提取小鱼仙草总黄酮，采用分光光度法测定总黄酮的含量，以总黄酮提取得率为考察指标，考察溶媒倍数、提取时间和提取次数等因素对小鱼仙草总黄酮提取得率的影响，利用响应面分析法优化提取工艺，确定总黄酮的最佳提取工艺。结果：小鱼仙草总黄酮的最佳提取工艺为：加药材20倍量浓度为70%乙醇，于90℃水浴回流提取3次，每次1.9h。此工艺下小鱼仙草总黄酮的提取得率达8.50%。结论：该工艺提取得率高、操作简便.freelethodo

2、logy，RSM)是目前比较通用的设计分析方法，它通过多元二次回归方程拟合多因子实验中多个因子与响应值间的关系，通过对方程求极值的方法达到参数优化的目的6～9。本研究在前期单因素实验的基础上，采用响应面分析法，根据BoxBehnken组合设计原理，考察了影响小鱼仙草总黄酮回流提取效果的主要因素，确定了其最佳提取工艺条件，为更好地开发以小鱼仙草总黄酮为主的药物及其制剂提供了实验参考。1仪器与试药osladiantheraMaxim.的地上部分，阴干，粉碎，备用。芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所(批号：10008020030)，所用试剂均为分析纯。

3、2实验方法与结果2.1总黄酮的含量测定精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品10.6mg，加50%乙醇溶解定容于50mL容量瓶，得浓度为2.12mgomL-1标准品溶液。精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置25ml容量瓶中，加5%NaNO21.0mL，摇匀，放置6min后加10%Al(NO3)31.0mL，摇匀，放置6min后再加10%NaOH10mL，加50%乙醇稀释至25ml，混匀，静置15min，同行试剂作空白，于510nm处测定吸光度10，以吸光度值为纵坐标，以芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A

4、=0.5464C+0.0056，r=0.9997，结果表明芦丁在0.212～1.272mg范围内线性关系良好。2.2提取工艺研究根据BoxBenhnken的中心组合实验设计原理，综合单因素实验结果，在选定乙醇浓度为70%、提取温度为90℃的前提下，选择溶媒倍数、提取时间和提取次数3个因素作为自变量设计响应面分析实验，分别以X1、X2、X3表示，每个自变量的低、中、高水平分别以-1、0、1进行编码，以小鱼仙草总黄酮提取得率作为响应值Y。实验因素及水平安排见表1。表1实验因素及水平安排表分别精确称取小鱼仙草干燥药材粉末5.0g，根据表1选择的因素和水平，

5、70%乙醇回流提取，过滤，加同浓度的乙醇溶液定容至250mL，摇匀，作为供试品溶液。精密移取0.3mL供试品溶液，测定总黄酮含量，计算总黄酮提取得率，结果见表2。表2响应面实验安排及结果(n=3)注：共有15个实验，其中12个为析因实验，3个为中心实验以估计误差。采用SAS9.1.3软件对表2结果进行响应面回归分析，得拟合方程：Y=8.436667+0.11X1+0.2X2+0.2425X3-0.107083X12+0.1775X1X2+0.0625X1X3-0.077083X22+0.1575X2X3-0.172083X32(R=0.9622)。并作

6、回归方程显著性检验及方差分析，结果见表3。表3回归方程的显著性检验及方差分析结果.由表3可知，回归方程具有显著性，且线性相关系数R在置信区间95%，说明该模型与实际实验拟合较好。可用于替代实验点对实验结果进行分析。方程中一次项对小鱼仙草总黄酮提取得率有显著性影响，二次项、交互项则无显著性影响，因此各因素与指标之间是简单的线性关系，而不是二次关系。其中，提取时间(X2)和提取次数(X3)对总黄酮提取得率有显著性影响，而溶媒倍数(X1)则无显著性影响。并作相应的等值线图和响应图，结果见图1～6。经SAS软件分析计算后可知，理论最佳回流提取工艺为：加药材24

7、.30倍量的浓度为70%乙醇于90℃水浴回流提取2.54次，1.85h。在此条件下，小鱼仙草总黄酮提取得率理论值为8.78%。综合考虑实际操作的简便及实验方差分析结果，确定最佳回流提取工艺为：加药材20倍量浓度为70%乙醇，于90℃水浴回流提取3次，每次1.9h。按最佳提取工艺进行验证性实验，测定小鱼仙草总黄酮含量，计算提取得率，结果总黄酮的提取得率为8.54%，RSD=0.47%，证明该工艺稳定，重现性好。3结论与讨论数理统计方法在中药有效成分的提取工艺中应用广泛，通常采用正交设计法，但该法仅对实验所选取的因素水平进行优化选择，不能在给出的整个区域上

8、找到考察因素的最佳细化值。而响应面分析法作为一种新的统计方法，可通过中心组合实验，研究多种因素