响应面法优化微波提取柚皮总黄酮工艺论文

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1、响应面法优化微波提取柚皮总黄酮工艺论文1实验材料与方法1.1实验材料：蜜柚，九成熟（市售）、芦丁（中国药品生物制品检定所提供）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠均为优级纯；二次蒸馏水1.2主要仪器设备：FA2004型电子天平（上海精科）；722-1型电热恒温干燥箱（湖北省黄石市医疗器械厂）；HK-04A200g手提式粉碎机（广州旭朗机械设备）；WD900ASL23-2型微波炉（格兰仕）；SHZ-III循环水多用真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；722型可见分光光度计1.3实验方法1.3.1实验材料的预处理柚皮→洗净→切片→5

2、0℃干燥→冷却→粉碎过40目筛→制得柚皮粉。1.3.2芦丁标准曲线及回归方程精确称取芦丁对照品0.01g用80%乙醇溶解，定容于100ml容量瓶中，配制成0.1g/L的芦丁对照品溶液。准确移取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml的芦丁对照品溶液于10ml容量瓶中，用乙醇补充至3.0，加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀后放置6min，然后加入10%硝酸铝溶液0.5ml，摇匀后放置6min；最后加入1mol/L氢氧化钠溶液4ml，用80%乙醇补充至刻度，摇匀后放置15-20min，以相应试剂做空白，于51

3、0nm处测定吸光度，制作芦丁标准曲线，线性回归得到吸光度A与黄酮质量浓度的方程：A=12.136c—0.0045，相关系数R=0.9980.1.3.4微波法提取总黄酮的方法称取1.00g柚皮粉于锥形瓶中，加入80%乙醇溶液35mL，在解冻档下微波处理6min(每次加热2min，放置1min，累计达6min)，过滤，定容至10011mL。采用硝酸铝比色法，在510nm处测定吸光度，计算总黄酮得率。1.3.5总黄酮类物质的测定按以上方法用提取液代替芦丁实验，利用回归方程进行计算即可。　　X=m1V2D／m×100%式中X———样

4、品中总黄酮含量，mg／mL；　　　m1———根据标准曲线计算出待测液中黄酮的量，mg；　　　m———样品质量，g；　　　D———样品的总稀释倍数；V2———样品提取液总体积，mL。2结果与讨论2.1微波法提取总黄酮工艺条件单因素试验设计2.1.1乙醇浓度对总黄酮提取效果影响称取5份1.00g柚皮粉分别置于锥形瓶中，在料液比固定在1:35、提取时间为5min，解冻档的条件下，分别对柚皮粉按以下不同乙醇浓度50%、60%、70%、80%、90%进行微波提取，布氏抽滤，滤渣以同样的条件提取、抽滤，合并滤液，然后用相应浓度的乙醇水溶

5、液定容至50mL，按照制作标准曲线的方法得出柚皮中总黄酮的提取率，结果见图1。图1乙醇浓度对总黄酮提取率的影响由图1可知，随着乙醇浓度的增加，总黄酮的提取率也在升高，在乙醇浓度为80%时达到最大值，但当乙醇浓度继续增大时，提取率下降，因此乙醇浓度11为80%左右为宜。2.1.2料液比对总黄酮提取效果的影响称取5份1.00g柚皮粉分别置于锥形瓶中,在乙醇浓度固定在80%、提取时间为5min，解冻档的条件下，分别对柚皮粉按以下不同料液比1:20、1:25、1:30、1:35、1:40进行微波提取，方法同上，得出总黄酮提取率，结果

6、见图2。图2料液比对总黄酮提取率的影响由图2可以看出，在液料比为1:20到1:35增加的过程中，总黄酮的得率随液料比的增大升高，液料比1:35是达到最大，随后提取率下降，因此选取1:35较为合适。2.1.3提取时间对总黄酮提取效果的影响称取5份1.00g柚皮粉分别置于锥形瓶中,在乙醇浓度固定在80%、料液比为1:35的条件下，分别对柚皮粉按以下不同提取时间3、4、5、6、7min进行微波提取，方法同上，得出总黄酮提取率，结果见图3。图3提取时间对总黄酮提取率的影响11由图3可以看出,开始时总黄酮得率随提取时间的延长而升高,当

7、提取时间达到6min时，总黄酮得率达到最高，之后随时间继续延长，总黄酮得率不再提高反而略有下降，因此选择提取时间为6min为宜。2.2中心实验设计与响应面分析采用软件Design-Expert8.0中的Box-Behnken试验设计原理[14]，在乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素对柚皮总黄酮提取率的研究的基础上，综合单因素试验结果，采用响应面分析法在3因素3水平上，以乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素为自变量，柚皮总黄酮提取率为响应值进行优化，以达到最大限度提取柚皮总黄酮的目的。试验因素与水平设计表见表1，响应面试验方案及

8、结果见表2。表1Box-behnken实验设计因素与水平水平因素乙醇浓度%(A)料液比(g:mL)(B)提取时间min(C)-1701:3050801:3561901:407表2Box-Behnken中心组合设计方案及实验结果实验号A:乙醇浓度%B:料液比C:提取时间minY:总黄酮得率%