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1、脉冲场电泳介绍（PFGE）一、脉冲场电泳（PFGE）的原理二、脉冲场电泳（PFGE）的操作流程三、脉冲场电泳（PFGE）的应用主要内容脉冲场电泳（PFGE）的原理核酸的凝胶电泳:核酸凝胶电泳是重组DNA技术的核心技术之一，它可以按分子量大小对DNA或RNA进行分离。因此，可用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段，也是许多分子生物学研究方法，如DNA分型、DNA核苷酸序列分析、限制性内切酶片段分析、凝胶回收等等一系技术的技术基础。常用的核酸凝胶电泳有琼脂糖(Agarose)凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PA
2、GE）。可以在水平或垂直的电泳槽中进行。脉冲场电泳（PFGE）的原理脉冲场电泳（PFGE）的原理琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2-50kb之间。聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围为1-1,000bp之间。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。浓度（%）标准(kb)高强度(kb)低熔点(kb)低黏度低溶点(kb)0.31~500.50.7~250.80.5~150.8~100.8~101.00.25~120.4~80.4~81.20.15~60.3~70.3~71.50.0
3、8~40.2~40.2~42.00.1~30.1~33.00.05~10.5~14.00.1~0.56.00.01~0.1不同类型琼脂糖分离DNA片段的范围脉冲场电泳（PFGE）的原理脉冲场电泳（PFGE）的原理丙烯酰胺浓度（%）有效分离范围（bp）二甲苯氰FF溴酚蓝3.51000~20004601005.080~500260658.060~4001604512.040~200702015.025~150601520.06~1004512DNA在聚丙烯胺凝胶中的有效分离范围脉冲场电泳（PFGE）的原理在凝
4、胶电泳中或后，加入溴化乙锭（Ethidiumbromide，EtBr）染料对核酸分子进行染色，然后放置在紫外光下观察，可灵敏而快捷地检测出凝胶介质中DNA的谱带部位，即使每条DNA带中仅含有0.05μg的微量DNA，也可以被清晰地检测出来。普通核酸电泳的应用：1、分子克隆-PCR产物特异性的确认2、RNA完整性的确认（定量PCR的验证环节）脉冲场电泳（PFGE）的原理脉冲场电泳（PFGE）的原理﹡脉冲场凝脉电泳(Pulsedfieldgelelectrophoresis,PFGE),是近年发展起来的一种重
5、要的分离大分子量线性DNA分子的电泳技术。﹡普通的琼脂糖凝胶电泳分离DNA分子的上限是50kb﹡大于该极限的DNA分子,常规的琼脂糖凝胶便失去了其分子筛的作用,导致电泳带型无法分辨，PFGE的发明正好解决了这一问题。脉冲场电泳（PFGE）的原理﹡1984年,Schwartz和Cantor首次用此技术成功分离得到酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)细胞的16条完整染色体DNA。﹡此后,随着PFGE技术的不断改进,现已具有分辨出高达10Mb级DNA的能力。﹡这一独具的高分辨力使PFGE
6、的应用范围已涉及到几乎所有生物基因组结构的研究。PFGE的基本原理是对琼脂糖凝胶外加交变的脉冲电场,其方向、时间和电流大小交替改变,每当电场方向发生改变时,大分子DNA便滞留在凝胶孔内,直至沿新的电场轴重新定向后,才能继续向前泳动,DNA分子越大,这种重新定向需要的时间就越长,当DNA分子改变方向的时间小于脉冲时间时,DNA就可以按照其分子量大小分开,经EB染色后在凝胶上出现按DNA大小排列的电泳带型。这种电泳技术促进了癌症研究、食品安全、公共健康、品质控制和基因组作图的进步。脉冲场电泳（PFGE）的原理
7、PFGE的原理PFGE普通核酸电泳脉冲场电泳（PFGE）的原理BIO-RAD脉冲场电泳的型号选择脉冲网实验室使用BIO-RAD的脉冲场电泳系统分离菌株DNA，电泳完毕后凝胶用EB染色，然后用BIO-RAD的分辨率更高的成像仪采集和处理图像，并制成TIFF格式，使用带数据共享工具的Fingerprinting软件或BioNumeric软件进行分析。该模式成功地应用于细菌性传染疾病的溯源及监控。CHEF-DRIII脉冲场电泳系统的配件脉冲场电泳（PFGE）的实验流程所有的培养细胞用琼脂糖包被，避免后续处理过程
8、中DNA被剪切琼脂糖和细胞的混合物注入制样模块中，(1.5mmx10mmx5mm)，凝固后，胶块可以从制样模块中取出。（2）细胞壁裂解，蛋白的消化ProteinaseK胶块在细胞裂解液和蛋白酶K溶液中处理Agarose（1）细胞包被DNACellularProteinCellWall制好的胶块，可以在1天内或4天中进行后续处理脉冲场电泳（PFGE）的操作流程胶块的制备:常规的DNA制备方法得不到完整的大分子量DNA,因为DNA
