《生物化学实验》(精).ppt

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1、《生物化学实验》周小慧实验室规则１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。实验室规则３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。４、注意安全，用吸量

2、管吸取试剂时应使用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。实验室规则５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水槽。实验结束后应将实验台整理好。并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，经老师检查同意后，方可离开实验室。实验须知１、实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明确学习目标，能简述实验内容及主要的操作步骤。２、实验过程中，

3、应根据实验指导及老师的要求，认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验做错应要求重做，反对弄虚作假。３、实验结束后，要认真书写实验报告，及时交老师批阅。实验报告包括如下内容：①实验项目、②实验原理、③主要操作步骤、④实验结果、⑤分析与讨论等。实验报告实验报告包括如下内容：１、实验项目２、实验原理３、主要操作步骤4、实验结果5、分析与讨论等实验项目实验1:改良双缩脲试剂测定种子蛋白质含量实验2:维生素C的测定实验3:鞣质含量的测定(络合滴定法)实验4:植物组织中过氧化物酶活

4、性的测定实验5:淀粉的分离制备与净化实验6:总淀粉量的测定实验7:糖苷的提取、分离、精制与检识实验8:Cytc的制备及测定实验1:改良双缩脲试剂测定种子蛋白质含量一、实验原理：具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，因此蛋白质在碱性溶液中，也能与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用来测定蛋白质的浓度。蛋白质或多肽加热稀碱溶液CuSO4紫红色二、操作步骤1、1、制作标准曲线：取12支干试管，编号，按下表平行操作。012345标准蛋白液/mL蒸馏水/mL双缩脲试剂/mL02.0

5、10.00.41.610.00.81.210.01.20.810.01.60.410.02.0010.0摇匀，置40℃水浴中保温15min，然后以0号试管为空白对照，在550nm处比色A550蛋白质浓度mg/mL以A550（取两组测定的平均值）为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。00.330.6711.331.6700.0230.0430.0650.0820.11二、操作步骤1、样品测定将板栗剥壳去皮，剪碎→称0.3g两份研成浆状→加2mlAUC溶液，反复研磨抽提10分钟→转入试管中，并用10ml

6、双缩脲洗研钵，一并转入试管摇匀→置40℃水浴中保温15分钟→棉花过滤→去渣，滤液澄清透明（V滤液=），测A550→从标准曲线上求得测定样品蛋白质的浓度，计算测定样品中蛋白质的毫克数。三、结果计算蛋白质含量（%）=测得蛋白质的毫克数鲜样重×1001000思考题1、干扰本实验的因素有哪些？2、简述蛋白质的呈色反应？3、试比较凯氏定氮法和比色法的优缺点？实验2:维生素C的测定2,6—二氯酚靛酚滴定法一、实验原理：维生素C（抗坏血酸）具有很强的还原性。还原型抗坏血酸能将染料2.6-二氯酚靛酚还原成无色的2.6-二

7、氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢抗坏血酸。在中性或碱性溶液中，氧化型2.6-二氯酚靛酚呈蓝色；在酸性溶液中呈红色，被还原后变无色，因此，当用2.6-二氯酚靛酚滴定样品中还原型抗坏血酸时，在抗坏血酸尚未全部被氧化时，滴下的2.6-二氯酚靛酚立即被还原成无色。当抗坏血酸全部被氧化后，则滴下的染料立即使溶液呈淡红色，即为终点。还原型抗坏血酸氧化型2.6-二氯酚靛酚（红色）还原型2.6-二氯酚靛酚（无色）氧化型2.6-二氯酚靛酚（蓝色）O=C

8、HO—C‖HO—C

9、H—C

10、HO—CH

11、CH2OHOO=C

12、O=C

13、O=C

14、

15、H—C

16、HO—CH

17、CH2OHO脱氢抗坏血酸=N——O-Cl

18、O=

19、Cl=N——OHCl

20、O=

21、ClN——OHCl

22、HO

23、Cl——

24、H实验原理H+OH-二、操作步骤1.提取：洗净待测材料,吸干表面水分，然后称取0.5g，加2%草酸200ML（抑制抗坏血酸氧化酶），在高速组织捣碎机中打成匀浆。称取浆状物5.0g，放入小烧杯中，然后转入50ML容量瓶中，以2%草酸洗净烧杯，并定容至刻度，充分摇动，然后静置10分钟，过滤于50ML三