《生物化学实验》PPT课件

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1、生物化学实验BiochemicalExperiment实验基本知识容量瓶液体的量取液体的倾倒滴管的使用试纸的使用一定质量分数的溶液的配制滤纸的折叠物质分离与提纯－－过滤萃取与分液实验内容安排共36学时1、绪论　生物化学实验规则及常用仪器使用入门（2学时）2、实验一纸层析分离鉴定氨基酸（6学时）3、实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（4学时）4、实验三蛋白质的颜色反应（2学时）5、实验四蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）6、实验五凝胶过滤法除蛋白质中的离子（4学时）7、实验六酵母RNA的提取和鉴定(4学时)8、实验七血糖含量的测定（4学时）9、实验八脂肪酸的β-氧化

2、（5学时）10、实验报告讲解及考核（2学时）1实验目的掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法；掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能；培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。绪　论2通过生物化学实验应该做到学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验。掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，

3、尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。3.1实验记录实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。实验中应及时准确地记录(专用纸，事先在记录纸上设计好各种记录格式和表格）所观察到的现象和测量的数据。实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如实记录，不得涂改。实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。3实验记录与实验报告3实验记录与实验报告3.2实验报告实验报告的格式应为：⑴

4、实验目的；⑵实验原理；⑶仪器、材料和试剂；⑷实验步骤；⑸结果讨论（含数理据处）；⑹注意事项;(7)思考题注意：实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有关的文献和教科书，充分运用己学过的知识和生物化学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析和见解，并欢迎对实验提出改进意见。4实验成绩评分方法实验预习情况（10%）实验操作情况（20%）实验报告情况（70%）生物化学实验技术理论层析技术1903年，俄国科学家M.C.Jber首创了一种从绿叶中分离多种不同颜色色素成分的方法，命名为色谱法(Chromatography)，由于翻译和习惯的原因．又常称为层析法。80多

5、年来，层析法不断发展，形式多种多样。50年代开始，相继出现了分配层析、离于交换层析、凝胶层析、亲和层析、吸附层析等。几乎每一种层析法都已发展成为一门独立的生化高技术，在生化领域内得到了广泛的应用。一、层析技术一、层析技术1、层析技术原理2、层析技术分类3、常用层析技术原理1、层析技术原理层析原理：是一种物理的分离方法，利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。2、层析技术分类名称操作方式固定相流动相分

6、离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体溶解度离子交换层析离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体固体液体气体吸附力亲合层析酶与底物抗原与抗体固体液体配体专一性凝胶层析凝胶过滤固体液体分子大小3、常用的层析原理（1）分配层析——纸层析原理：溶质在互不相溶的两相中溶解度不同，在终点时达到一种平衡，其比值为一个常数，即分配系数（α）。固定相内溶质的浓度流动相内溶质的浓度固定相：滤纸上吸附的水流动相：有机溶剂（正丁醇）α=128646432643216484816832483284204040204212304030122纸层析纸层析是最

7、简单的液一液相分配层析。滤纸是纸层析的支持物。当支持物被水饱和时，大部分水分子被滤纸的纤维素牢牢吸附，因此，纸及其饱和水为层析的固定相，与固定相不相混溶的有机溶剂为层析的流动相。对某些特定化合物，在特定的展层系统，一定的温度条件下，Rf是个常数。（2）离子交换层析原理：将能与周围介质进行离子交换的不稳定离子固定于惰性基质上，从而分离介质中的组分。常用的惰性基质：人工合成树脂（单体：苯乙烯、交联剂：二乙烯苯）阳离子交换剂：磺酸甲基、羧甲基、磷酸基阴离子交换剂：二乙基胺乙基、三乙基胺乙基可交换离子：阳离子：Na+、H+阴离子：Cl-、OH-示意图（交换树脂表面）示

8、意图（离子交换过程）电离基团（磺酸根）