《生物化学实验教案》PPT课件

《《生物化学实验教案》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、生物化学实验实验Folin-Wu法定量测定血糖的含量一、目的要求1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。2、学会制备无蛋白血滤液。二、实验原理Cu2+(CuSO4)+葡萄糖Cu+(Cu2O)Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物OD420比色无蛋白血滤液中的葡萄糖和碱性硫酸铜溶液共热反应，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）,Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。二、实验仪器1、新鲜兔子血2、滤纸3、血糖

2、管（25ml）4、奥氏吸管（1ml）5、锥形瓶（50ml）6、漏斗7、电炉8、水浴锅9、7200型可见分光光度计血糖管奥氏吸管7200型分光光度计1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。4、碱性硫酸铜溶液A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11

3、g溶于蒸馏水，稀释定容至1000ml.B液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。临用时，A液：B液=15：1混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。四、实验试剂5、酸性钼酸盐溶液：称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色

4、瓶中。1、无蛋白血滤液的制备：用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂—草酸钠）1ml,缓缓放入50ml锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀。再加0.33mol/LH2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15分钟，至沉淀变为暗棕色（如不变色可再加0.33mol/LH2SO41—2滴）。用干滤纸过滤。先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液不清需重新过滤。每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml全血。五、实验步骤2、血糖的定量测定：取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入1ml蒸馏水（空白管）；第二支血

5、糖管中加1ml标准葡萄糖液；用奥氏吸管吸取无蛋白血滤液1ml，放入第三支血糖管中。然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后各加4ml酸性钼酸盐溶液。一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420波长处比色，以空白管调节零点。按下式计算100ml全血中所含血糖的含量m=OD1/OD2×C×10×100式中:m=100ml全血中含血糖毫克数C=标准液葡萄糖含量（0.1mg/ml）OD1=样品液光密度值OD2=标准液光密度值六、结果计算：实验肝糖元的提取和鉴定一、实验原理糖原在

6、浓碱中稳定，将肝组织先置于浓碱中加热，是蛋白质及其他成分分解而保留肝糖元。再用浓硫酸使糖原脱水生成糖醛衍生物，衍生物和蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖一起比色定量。二、实验仪器1、新鲜肝脏2、100ml容量瓶3、7220分光光度计4、水浴锅5、试管(ml、2ml、5ml)三、实验试剂1、0.9%NaCl溶液：0.9gNaCl溶于100ml蒸馏水中2、30%NaOH溶液：30gNaOH溶于100ml蒸馏水中3、标准葡萄糖溶液（0.05mg/ml）：准确称取5mg分析纯葡萄糖（预先在110干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定容至100ml.4、

7、显色剂：称取0.2g蒽酮加入100ml浓硫酸中。此试剂不稳定，以临用时配用为宜，冰箱保存可用4—5天四、实验步骤1、迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用0.9%NaCl溶液洗去附着的血液并用滤纸吸干，准确称取肝组织0.5g，放入盛有1.5ml30%NaOH的试管中，置于沸水浴中加热20分钟，取出后冷却，将管中内溶物全部转移到100ml容量瓶中（用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶）加蒸馏水定容。2、取干燥试管三支，注明空白管、标准管、测定管，按下表进行操作。加毕，摇匀，置沸水浴中10分钟，冷却，以空白管调节零点，在620nm波长下比色测定。五、结果计算100

8、g肝组织中所含糖原的克数=（od测/od标）×c标×2×100×（1/1000）