生物化学实验.ppt

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1、生物化学实验生化教研室张丽娜1学习生化实验的目的1.加深对生物化学理论知识的理解2.学习、掌握常用生物化学与分子生物学实验技术，如分光光度法、层析、电泳、离心等2实验报告的书写格式一、实验标题和日期二、实验目的三、实验原理四、实验操作步骤五、结果（真实和客观）六、结果分析（详细）七、意见和建议3实验须知1、穿实验服，不迟到早退，课前预习。2、严格按照操作步骤进行每一步实验（时间性，反应剧烈），保持安静。3、药品用完归还原处，保持整洁。4、注意水、电、煤气和有腐蚀性、毒性的试剂的安全使用，自我保护。5

2、、实验结束做好清洁卫生工作。6、如实客观地完成实验报告。4实验一酶的性质一、实验目的：1.加深理解酶作用的特异性及高效率的概念2.掌握T、pH、a、i等是如何影响酶活性5二、实验原理1、酶的专一性酶具有高度专一性，即对底物有严格的选择性。（产物的增多）淀粉麦芽糖蔗糖唾液淀粉酶×+Cu2+(班氏试剂)Cu2O砖红色沉淀煮沸的唾液淀粉酶6操作步骤：1.制备稀唾液。用清水漱口，行咀嚼动作5分钟，制得唾液。2.立即分出约1ml，沸水浴煮沸约10min。73、取小试管3只试剂（滴）1230.5%淀粉1616—

3、0.5%蔗糖——16稀唾液8—8已经煮沸的稀唾液—8—混匀，置于37度水浴箱中保温10min84.另取试管3支，各加班氏试剂20滴。并分别从表中三支试管中各取出溶液10滴，分别加入各试管中。5.沸水浴中加热3min，冷却后比较现象。注意事项：水煮沸后才可以开始加热试管。92、温度对酶活性的影响人体内大多数酶的最适温度为37℃至40℃。10本实验利用碘与淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同温度下催化淀粉水解的速度。（底物的减少）（与碘呈蓝色）（与碘呈紫色至红色）（与碘不呈色）淀粉糊精麦芽

4、糖唾液淀粉酶唾液淀粉酶113、取小试管3支试剂（滴）1230.5%淀粉101010PH6.8缓冲液3330.85%NaCl333混匀，分别将1、2、3号试管依次置于沸水浴、温水浴和冰水浴中5min。然后向各管加入稀唾液3滴，继续放置5min。124.每管取出2滴试液在白瓷板上，加碘液1滴，观察颜色5.将1、3两试管改置37度水浴中5min，加碘液1滴，观察颜色变化并分析。132、pH、激动剂、抑制剂对酶活性的影响6最适PH10PH反应速度/相对活力胰蛋白酶人体内多数酶的最适pH在7.0左右。例如唾液

5、淀粉酶的最适pH为6.8。14氯离子对该酶活性有激动作用；铜离子则有抑制作用。本实验借助淀粉与碘的呈色反应来观察唾液淀粉酶的水解作用，从而判断pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响。（底物的减少）15实验二丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制一、实验目的：掌握竞争性抑制作用的概念及其特点16二、原理：抑制剂与底物竞争酶的活性中心，而使酶活性受到抑制。这种竞争性抑制作用的强弱受抑制剂与底物相对浓度的影响。17琥珀酸延胡索酸COOHCH2丙二酸COOHCOOHCH2CH2COOHHOOCCHHCCOOH琥珀酸脱

6、氢酶2H抑制18本实验用甲烯蓝作受氢体，接受琥珀酸脱下的氢，自身变为甲烯白。MB+2HMB：2H甲烯蓝（蓝色）甲烯白（白色）注意：甲烯白容易被空气氧化，所以需要隔绝空气。19三.实验操作四.注意事项：肌肉提取液混匀加液体石蜡前将试管混匀，加后勿混匀。20实验三激素对血糖浓度的调节一、实验目的1.掌握邻甲苯胺硼酸法（O-TB）测定血糖浓度的方法及胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的调节作用2.了解比色分析的基本原理（Lambert-beer定律）3.掌握722型分光光度计的使用方法及比色分析计算公式21二、实

7、验原理（一）比色分析原理有色溶液T=I/I0A=-lgT=lgI0/I根据Lambert-Beer定律：A=KCL(K:吸光系数；C：溶液的浓度；L：光透过液层的厚度)A1=K1C1L1A2=K2C2L2K1=K2；L1=L2A1/A2=C1/C2透光度吸光度溶质溶剂22（二）血糖测定(0-TB)原理酸性/△邻甲苯胺1、己醛糖5－羟甲基－2－甲醛呋喃席弗氏碱液H20H20(青色)2、G属于己醛糖，另取已知浓度的标准葡萄糖溶液，在同样条件下进行显色，得到青色的席弗氏碱液3、将未知液与标准液于722型分

8、光光度计，分别测定600nm吸光度（A）4、将（A测）和（A标）待入计算公式，求未知液的血糖浓度（未知）23三、操作方法1、动物处理（注射激素和采血）小鼠1腹腔注射胰岛素0.1ml小鼠2腹腔注射肾上腺素0.03ml小鼠3(正常对照鼠)分别剪头，收集血液于抗凝管中（边收集血液，边摇动试管，防止血液凝固）作用半小时24腹腔注射针头与皮肤45°夹角打入激素取量需要准确：胰岛素0.1ml肾上腺素0.03ml注射前赶走气泡25注意点（1）各种激素，取量需准确；（2）剪头取血，两