效应面法优化蒙花苷水解工艺及其水解物的醛糖还原酶抑制活性研究.pdf

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1、第39卷第11期中圈中药杂志VoJ1．39，Issue112014年6月ulle，2014效应面法优化蒙花苷水解工艺及其水解物的醛糖还原酶抑制活性研究王娇，许浚，张铁军(1．天津医科大学，天津300070；2．天津药物研究院天津市中药质量控制技术工程实验室，中药现代制剂与质量控制技术国家地方联合工程实验室(天津)，释药技术与药代动力学国家重点实验室，天津300193)[摘要]目的：用效应面法对蒙花苷的水解工艺进行优化，通过醛糖还原酶模型研究其水解物金合欢素醛糖还原酶的抑制活性。方法：建立水解物金合欢素

2、体外生物酶模型，通过测定NADPH的荧光吸收，计算水解物金合欢素对醛糖还原酶的抑制率，从而得到水解物的醛糖还原酶抑制活性的Ic。的平均值。在蒙花苷水解工艺中采用效应面法优化水解工艺，并对结果进行预测分析。结果：水解物金合欢素醛糖还原酶抑制活性，其IC。的平均值为2．74mg·L～。优选的水解工艺为水解时间7．4h，硫酸甲醇0．54mol·L～，固液比3：1。结论：水解物金合欢素具有比蒙花苷较好的醛糖还原酶抑制活性。优选的蒙花苷水解工艺简便，预测性良好。[关键词]蒙花苷；效应面分析法；金合欢素；醛糖还原

3、酶抑制剂糖尿病慢性并发症是严重影响患者生命质量的合欢素干预下的变化。全身性病变，糖尿病视网膜病变是发病率较高的一1材料种糖尿病慢性并发症。醛糖还原酶抑制剂是通过抑LabAlliance高效液相色谱仪(SeriesI1一元泵制醛糖还原酶的活性，间接抑制多元醇通路的一类系统，LabAlliance色谱工作站)；AB204．N电子天平延缓和阻断糖尿病并发症的药物¨。近年来从植(瑞士MErlTLERTOLEDO公司)；HS-3120超声波物提取出的具有抑制醛糖还原酶活性的化合物主要清洗器(奥特赛恩斯机器有限公

4、司)；DF一101S集热有黄酮类化合物。式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪高科仪器厂)。蒙花苷为菊科植物野菊花Chrysanthemumindi—蒙花苷对照品(实验室自制，经HPLC归一法检cumL．的主要天然黄酮类成分。近年来国内外测纯度>97％)，金合欢素(中国食品药品检定研究研究表明，蒙花苷对大鼠晶状体的醛糖还原酶(AR)院)；甲醇(色谱醇，天津市康科德科技有限公司)；有抑制活性J。本实验室前期研究表明，蒙花苷属冰醋酸(色谱醇，天津市康科德科技有限公司)；其于低溶解度，透过性较差的药物J。药物比表

5、面积他试剂均为分析醇。和脂溶性对药物体内吸收有重要的促进作用，因此Wister大鼠，雄性，天津市山川红实验动物技术通过去糖基化增加蒙花苷的比表面积和脂溶性，对有限公司，动物合格证号SCXK(津)2009-0001。蒙花苷进行结构修饰。效应面法具有试验次数少，2方法与结果精确度高，应用方便的特点，该设计方法可以很好地2．1含量测定应用于药学领域j。本研究以蒙花苷水解率为指2．1．1色谱条件流动相乙腈一水一冰醋酸(40：59：标，运用效应面法进行蒙花苷水解工艺优化。选用1)；体积流量1mL·min～；检测

6、波长326nm；进样经典的非细胞模型l]，评价醛糖还原酶在水解物金量10L；柱温30℃。2．1．2标准曲线的绘制分别精密称取蒙花苷和[收稿日期]2013．12-09金合欢素对照品5．35，11．00mg，置于100mL量瓶[通信作者]张铁军，Tel：(022)23006848，E-mail：tiezhang4@si—中，加甲醇溶解至刻度，作为蒙花苷对照品储备液和n扎Com金合欢素对照品储备液。采用逐级稀释法用甲醇配[作者简介]王娇，硕士研究生，Tel：(022)23006843，E—mail：taoq

7、ibaojiaojiao369@aiiyun．tom置成不同浓度的蒙花苷对照品溶液和金合欢素对照·2060·第39卷第11期中圈烹。n药esea杂teda志edlcaVJ01u．n3e9．Issue112014年6月Chlnadoum，2014品溶液，摇匀，按照2．1．1项下色谱条件进行测定，2．2．3固液比称取6份蒙花苷，分别按固液比记录蒙花苷色谱峰面积及金合欢素色谱峰面积。以1：1，2：1，3：1，4：1，5：1，加入相应0．45mol·L硫蒙花苷对照品溶液质量浓度为横坐标(互．)，峰面积酸甲醇，

8、搅拌加热，水解温度95℃，水解时间7h，放积分值为纵坐标(．)进行线性回归，得回归方程为冷，取上清液测蒙花苷水解率，结果见图3，可知最yI．=7XI．一373．742，R=0．9992，线性范围0．1—适物料比3：1。52．9mg·L～；以金合欢素对照品溶液质量浓度为横坐标()，峰面积积分值为纵坐标(yA)进行线性回归，得回归方程为y^：7X一4828．128，R=0．9990，线性范围2．2～110．0mg-L～。2．1．3水解率的计算蒙花苷水解率=金