基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法分析山竹果皮缩合单宁.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第10期2010年10月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1492～1496DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01492基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法分析山竹果皮缩合单宁周海超魏淑东李敏林益明(厦门大学生命科学学院滨海湿地生态系统教育部重点实验室，厦门361005)摘要在反射模式(Reflectronmodes)下，去离子处理后，引入cs(CsC1，1．52g／L)作为阳离子化试剂，得到清晰的山竹果皮缩

2、合单宁的MALDI—TOF质谱图。解析该质谱图能得到完整的山竹果皮缩合单宁的结构信息：山竹果皮缩合单宁是从三聚体(m／z999)到十一聚体(m／z3303)分布的多聚物，离子峰最强的为五聚体(m／z1575)；同时存在3种结构单元：(表)儿茶素(C／EC)、(表)桔儿茶素(GC／EGC)和(表)阿福豆素(AC／EAC)，且C／EC、AC／EAC和GC／EGC的离子峰强度依次降低，同时在四聚体(m／z1440)到七聚体(m／z2303)均存在梧酰基；从四聚体(m／z1285)到八聚体(m／z2436)，不同的聚合

3、物中普遍存在A型连接。本研究优化了获取植物缩合单宁结构信息的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法。关键词山竹果皮；缩合单宁；基质辅助激光解吸附飞行时间质谱；阳离子化试剂；多聚物1引言缩合单宁(Condensedtannins)，也称原花色素(Proanthocyanidins)，广泛存在于植物界，主要由黄烷．3-醇结构单元缩合而成。按结构单元B环上羟基数目及取代位置的不同，缩合单宁主要可以分为以(表)儿茶素(C／EC)为基本结构单元的原花青定(Proeyanidin)、以(表)樯儿茶素(GC／EGC)为基本结构单

4、元的原翠雀定(Prodelphinidin)和以(表)阿福豆素(AC／EAC)为基本结构单元的原天竺葵定(Pro—pelargonidin)⋯，有些结构单元上还可能存在糖基化和酰化形式。各个结构单元之间通常通过c4一c8或C4．C6连接，形成B型连接的缩合单宁聚合物；有些结构单元间还可通过醚键相连，形成A型连接方式(图解1)。结构特征影响缩合单宁的生物活性和化学性质，包括结构单元类型、聚合度和结构单元的空间构型。近年来，基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI—TOF)作为软离子化质谱技术被广泛用于植物缩合单

5、宁的分析．4J。MALDI．TOF质谱能直接给出缩合单宁中分子质量不同的聚合物的分子离子峰，适用于缩合单宁基本结构单元、聚合度和连接方式的分析及其抗氧化活性与结构关系的研究。然而，一些影响MALDI—TOF质谱得到完整可靠的缩合单宁信息的因素(如样品去离子化处理及阳离子试剂的选择)已引起关注'。但不少研究工作并未重视这些影响，m川，从而可能导致得到缩合单宁信息或不完整或不准确。本研究在反射模式下，对样品和基质去离子处理，引入cs作为阳离子化试剂，以期获得完整可靠的山竹果皮缩合单宁的MALDI—TOF质谱信息。本

6、研究为准确获取植物缩合单宁结构信息提供了一种优化的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法。2实验部分2．1仪器、试剂和样品BrukerReflexIII基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪(德国Bruker公司)；SHZ—IIIB循环水真空泵(上海仪表供销公司)；SENCO旋转蒸发仪(上海申科科技有限公司)；FD一1冷冻干燥机(北京德天佑科技发展有限公司)。AmberliteIRP-64离子交换树脂(美国Sigma公司)；2，5一二羟基苯甲酸(DHB，美国Sigma公司)；CsC1(纯度I>99．5％，国药集团化学试剂

7、有限公司)；SephadexLH-20色谱填料(美国2010-02-26收稿；2010-06-12接受本文系教育部新世纪优秀人才支持计划(No．NCET-07-0725)和留学回国人员基金资助项目}E—mail：linym@xmu．edu．ca第1O期周海超等：基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法分析山竹果皮缩合单宁1493B型连接Btypelinkage图解1缩合单宁的结构单元及其连接方式Scheme1StructuralunitsandtypesoflinkagesofcondensedtanninsAmer

8、sham公司)；丙酮、甲醇和正己烷等均为分析纯；实验用水为二次去离子水。山竹(GarciniamangostanaL．)果皮。2．2样品处理山竹果实，2008年6月份购于当地超市，取果皮用蒸馏水清洗后迅速用70％丙酮溶液提取3次。收集并合并提取液，在40℃旋转减压蒸发除去丙酮。含有缩合单宁的水相用正己烷和二氯甲烷分别萃取3次，将水相冷冻干燥获得山竹果皮缩合单宁粗提物。粗提物用少量50％