基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别耐药细菌的研究

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1、硕士学位论文论文题目：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别耐药细菌的研究作者姓名李佳萍指导教师单伟光陈功祥学科专业药学专硕所在学院药学院提交日期2015年11月渐江工业大学学位论文原创惟汚巧，本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行硏究工作所取得的硏巧成果。陈文中已经加＾；１标注引規的内容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的硏究成梁，也不含为获得浙江工化大学或其它教嘗机构的学位证书而使用过的材料。对本文的硏究作出文中！重要贡献的个人和集体，巧已在

2、Ｍ明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。作者签名：＾£亨曰期：２〇／Ｃ年ａ月接．日学位论义版奴使用授奴书本学位论文作者完全了解学校育关保留、使用学位论文的规定，罔意学校保留并向厲家有关部ｎ或扔构送交论文的复印件和电子版，化许论文被瘡阅和借阅Ｌ。本人授权浙江工业大学可旦将本学位论文的全部或部分闲容编入有关数据库进行检索，可社采用影印、缩印或巧描等复剌手段保存和氾编本学位论文。本学位论文厲于１、□保密，在年解密后适用本授权书。２、不保密口。＂＂请巧レッ

3、上相应方框内打Ｖ｛）作者签名：落也円期：２＜？＾年，之月每曰斗导师签名：巧期：年月浙江工业大学硕士学位论文基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别耐药细菌的研究摘要目的：评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-assistedLaserDesorption/IonizationTime-of-flightMassSpectrometry,MALDI-TOFMS）VITEKMS对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐万古霉素屎肠球菌的快速鉴别能力。方法：收集279株金黄色葡萄球菌临床分

4、离株，应用VITEKMS质谱仪鉴定菌种，苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法初筛耐药菌株，聚合酶链式反应（PCR）检测mecA基因。采用VITEKMS建立甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）的数据库(SuperSpectra)，获得两组用于区分的特征峰，并应用临床菌株对新建立的SuperSpectra进行验证。同样收集196株屎肠球菌临床菌株，VITEKMS进行菌种鉴定，万古霉素和替考拉宁纸片扩散法初筛耐药菌株，PCR检测万古霉素耐药基因(包括vanA、vanB和van

5、M)。采用VITEKMS建立万古霉素耐药屎肠球菌（VRE）和万古霉素敏感屎肠球菌（VSE）的SuperSpectra，获得两组用于区分的特征峰，并应用临床菌株对新建立的SuperSpectra进行验证。结果：收集的279株金黄色葡萄球菌临床菌株中275株经VITEKMS确认为金黄色葡萄球菌，其中143株经纸片法药物敏感性和PCR扩增试验证实为甲氧西林耐药且携带mecA基因，132株为甲氧西林敏浙江工业大学硕士学位论文感菌株且不携带mecA基因，纸片扩散法和mecA基因检测符合率为100%。随机采集66株

6、MRSA临床菌株和1株标准菌株ATCC43300的质谱指纹图谱建立MRSASuperSpectra，随机采集64株MSSA临床菌株和2株标准菌株（ATCC25923、ATCC29213）的质谱指纹图谱建立MSSASuperSpectra，比对MRSA和MSSASuperSpectra得到两个质荷比为2305.6Da和3007.3Da的MRSA特征峰，而质荷比为6816.7Da的峰为MSSA特有的响应值较高的峰，验证结果显示该方法对MRSA鉴定准确率达84.21%，对MSSA的鉴定准确率达90.91%，对

7、于金黄色葡萄球菌是否耐药的鉴定总的准确率为87.32%。收集的196株屎肠球菌临床菌株经质谱鉴定均为屎肠球菌，其中105株经纸片法药物敏感性和PCR扩增试验证实为VRE（66株携带vanA基因，39株携带vanM基因），91株为敏感菌株，纸片扩散法和PCR结果符合率为100%。随机采集62株临床耐药株和58株临床敏感株的质谱指纹图谱分别建立VRESuperSpectra和VSESuperSpectra，比对两个SuperSpectra发现，6601.4Da处的峰为VRE特征峰，而3723.9Da和388

8、3.1Da处的峰为VSE的两个特征峰，临床菌株验证表明该方法对VRE的鉴定准确率为88.37%，VSE准确率为75.76%，对于屎肠球菌是否耐药的总鉴定准确率为82.89%。结论：VITEKMS可以通过采集耐药菌株和敏感菌株的质谱指纹图谱从而建立耐药和敏感菌株SuperSpectra，得到耐药株和敏感株的特征峰，激活后的SuperSpectra即可实现对单个菌株的耐药性的快速鉴别，该方法快速准确，将对临床耐药菌株鉴定产生革命性影响。浙江工业