用于单子叶植物启动子功能分析的pUKGF载体构建.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(2)：15—18JournalofHenanAgriculturalSciences用于单子叶植物启动子功能分析的pUKGF载I体构建丁博，杨文丽，李明，王俊斌，陈帅君，谢晓东(天津农学院农学系，天津一布里斯托环境变化对农作物影响研究中心，天津300384)摘要：为了对单子叶植物重要性状相关基因启动子进行研究，以栽体pGWB450为基本骨架，利用酶切方法将ubiquitin启动子序列和NPTⅡ抗性基因引入该栽体，构建了新载体pUKGF。其转基因单子叶植株可通过卡那霉素进行抗性筛选；另外，该载体含有Gateway元件，启动子可高效重组到该裁体中；

2、启动子下游是绿色荧光蛋白基因，根据该报告基因的表达部位，可确定启动子功能的组织特异性。该栽体在单子叶植物启动子鉴定方面将有广阔的应用前景。关键词：单子叶植物；启动子；载体构建；绿色荧光蛋白；限制性内切酶中图分类号：Q782文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)02—0015—04ConstructionofVectorpUKGFUsedforAnalyzingPromoterFunctionofMonocotyledonDINGBo，YANGWer卜li，LIMing，WANGJun-bin，CHENShuai—jun，XIEXiao—dong(Depart

3、mentofAgronomyofTianjinAgriculturalUniversity，Tianjin-BristolResearchCentreofEffectsofEnvironmentalChangesonCrops，Tianiin300384，China)Abstract：Inthestudy，thevectorpGWB450wasusedasabackbone，andtheubiquitinpromoterandtheresistancegeneNPTI1wereintegratedintothevectortoconstructthenewvectorpUK

4、GFbyenzymedigestionmethod，whichcouldbescreenedbykanamycinintransgenicmono—cotplants．Inaddition，thenewvectorcontainedtheGatewayelementswhichcouldintegratetheinterestedpromotersequenceintothevector，whiletheGFPgenewaslocatedinthedownstreamofthepromoterwhichwouldconfirmtheregulationpatternofpr

5、omoterinmonocotplants．Withmanyadvantages，thepUKGFvectorwouldhaveabroadapplicationprospectinidentifyingthepromoterfunctionofmonocotplants．Keywords：m0nocotyledon；promoter；vectorconstruction；greenfluorescenceprotein；restric—tionenzyme启动子决定了基因的组织器官表达特异性，同进和优化是其中最重要的一项内容，包括构建对启时还决定了基因在环境及内源激素作用

6、下的可诱导动子进行分析的载体。目前，应用于双子叶植物转表达或阻遏，因此对启动子进行功能分析有利于解基因体系中的启动子分析载体较多，如pCAMBIA析基因的表达方式。近些年人们对植物转基因技术(www．cambia．org)和pGWB系列载体等，这些进行了多方面的探索和改进，植物表达载体的改载体的选择标记基因受CaMV35S等双子叶植物收稿日期：2013一O6—2O基金项目：国家863计划项目(2012AA10A309)；天津市应用基础与前沿技术研究计划项目(11JCYBJC09100)；天津农学院科学研究发展基金计划(2Ol1N11)作者简介：丁博(1982一)，女，天津人

7、，实验师，硕士，主要从事作物遗传育种工作。E—mail：yuancircle@126．com*通讯作者：谢晓东(1975一)，男，内蒙古兴安盟人，研究员，博士，主要从事植物抗逆机理研究。E—mail：xiexiaod@gmail．corn16河南农业科学第43卷来源启动子控制，在双子叶植物中应用非常广泛_9]，1．3PCR扩增及产物回收但由于这些选择标记基因表达盒的CnM35S等PCR扩增反应体积为20L，反应体系中含1倍启动子在单子叶植物中的活性受限，将其用于单子Buffer，200tLmol／LdNTPs，0．