应用非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测人巨细胞病毒UL97基因H520Q突变.pdf

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1、2012年3月基础医学与临床March2012第32卷第3期Basic&ClinicalMedicineV0lI32No．3文章编号：1001·6325(2012)03—0322—05研究论文应用非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测人巨细胞病毒UL97基因H520Q突变赵晓涛，夏长胜，孙媛媛，王启，于波，邵勇，张正(1．北京大学人民医院检验科，北京100044；2．北京大学深圳医院深圳北京大学香港科技大学医学中心，广东深圳518036)摘要：目的建立非标记探针高分辨率熔解曲线分析技术(HRMA)检测人

2、巨细胞病毒(HCMV)UL97基因H520Q突变。方法构建HCMVUL97野生型以及H520Q突变质粒，非标记探针HRMA分型技术检测H520Q突变。结果直接从PCR产物得到的熔解曲线峰形无法区分野生型及H520Q突变型，应用非标记探针HRMA技术可以明显增加实验的敏感性及准确性，可成功区分从野生型到含有不同量的H520Q突变的基因型。结论非标记探针HRMA技术是一个敏感、经济的检测H520Q突变的基因分型方法。关键词：人巨细胞病毒(HCMV)；UL97；高分辨率熔解曲线技术(HRMA)中图分类号：

3、R512．99；R446文献标志码：ADevelopmentofhigh-resolutionmeltinganalysiswithunlabeledprobeforthedetectionofcodonH520QmutationintheUL97geneofhumancytomegalovirusZHAOXiao。tao，XIAChang．sheng，SUNYuanyuan，WANGQi，YUBo，SHAOYong，ZHANGZheng(1．Dept．ofClinicalLaboratory，Pe

4、kingUniversityPeople’SHospital，Beijing100044；2．Shenzhen—PKU—HKUSTMedicalCenter，PekingUniversityShenzhenHospital，Shenzhen518036，China)Abstract：ObjectiveTodevelopahighresolutionmeltinganalysis(HRMA)-basedgenotypictestingforthede-tectionofeodonH520Qmutati

5、onintheUL97geneofhumancytomegalovirus(HCMV)．MethodsWild—typeUL97andH520Qmutantwereconstructed．HRMAwithunlabeledprobewasusedasagenotypingmethodforthedetectionofH520Qmutation．ResultsBythemeltingpeaksinPCRproductsitwasnotabletodistinguishwild—typefromH520

6、Qmutation，howeverthesensitivityandaccuracyofHRMAweredramaticallyimprovedusingunla—beledprobe．UsingHRMAwithunlabeledprobe，wecouldsuccessfullydistinguishdiferentcontentsofH520Qfromwild-type．ConclusionsHRMAwithunlabeledprobeisasensitiveandcost—effectivege

7、notypingmethodforthedetectionofH520Qmutation．Keywords：humancytomegalovirus；UL97；highresolutionmeltinganalysis(HRMA)收稿日期：2011—12—20修回日期：2012—01—06基金项目：北京大学人民医院研究与发展基金(RDB2009—18)通信作者(correspondingauthor)：zhaoxt@bjmu．edu．cn赵晓涛应用非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测人巨细胞病毒UL9

8、7基因H520Q突变323人巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)定量PCR及临床诊断为巨细胞病毒感染患者的血初次感染后多呈潜伏状态，在肿瘤、移植后、艾滋病浆，患者签署知情同意书并通过北京大学人民医院等免疫抑制状态下活化可致严重感染。目前抗伦理委员会批准。采用病毒基因组DNA提取试剂HCMV的药物主要有：更昔洛韦(ganciclovir，GCV)盒(离心柱型)从血浆中提取病毒DNA，经PCR扩及其前体药物缬更昔洛韦(valganciclovi