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时间:2020-06-03
《非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测HBV P区rt204位点耐药突变.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·200·主堡堕鏖璧鎏瘟苤查垫!!生!旦箜!鲞箜兰塑堡垒也£g!i!!生!!望堡:垒!鲤塾兰!!!:!尘:鱼:№:堡·论著·非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测HBVP区rt204位点耐药突变毛雄英陈洁王卫华陈辉【摘要】目的建立一种基于非标记探针高分辨率熔解曲线技术(HRM)检测HBVP区以04位点耐药突变的方法。方法构建野生株rt204M、突变株rt204I和rt204V的质粒,设计、优化探针。利用质粒作为标准品建立HRM特征性解链图谱。收集2010年5月至2012年5月宁波大学附属医院诊治的18
2、5例慢性乙型肝炎患者外周血样本共185份,用HRM技术检测所有样本,并与特征性解链图谱比对,筛选出rt204位点的突变,再经基因测序验证。采用配对r检验比较两种方法的变异检出率。结果突变株rt204I、rt204V和野生株rt204M的熔解温度(Tm)分别为58.0。C、60.6℃和62.5。C;185份样本中,HRM技术成功分析168份(90.8%),基因测序成功分析155份(83.8%),二者差异有统计学意义(P<0.01);同时被两种方法检出的155份临床样本中,非标记探针HRM技术检测到野
3、生株75份(rt204M),变异株80份(55份rt204I、25份rt204V),变异检出率为51.6%(80/155);基因测序法检测到野生株110份(rt204M),变异株45份(30份rt204I、15份rt204V),变异检出率为29.0%(45/155),两种方法差异有统计学意义(P<0.01)。结论非标记探针HRM技术是一种简单、灵敏、快速、特异的HBVP区以04位点耐药突变检测方法。【关键词】肝炎病毒,乙型;高分辨率熔解;非标记探针;聚合酶链反应;突变;rt204位点Highres
4、olutionmeltinganalysiswithunlabeledprobefordetectionofrt204mutationinHBVPgeneMAOXiong一一ng+,CHENJie,WANGWei—hua,CHENHui.+NingboInstituteofMedicalSciences,Ningbo315000,ChinaCorrespondingauthor:CHENHui,Email:chenhuinb@gmail.con【Abstract】ObjectiveToestabl
5、ishamethodofhighresolutionmeltinganalysis(HRM)withunlabeledprobefordetectionofrt204mutationinHBVPgene.MethodsPlasmidswithwildstrainrt204M.mutantstrainsrt204Iandrt204Vwereconstructed,andtheprobesweredesignedandoptimized.HRMDlotswereestablishedbythecons
6、tructedplasmids.Atotalof185sampleswerecollectedfrompatientswithchronichepatitisBintheAffiliatedHospitalofSchoolofMedicineofNingboUniversityduringMay2010andMay2012.AllsamplesweredetectedbyHRM,andmatchedwithcharacteristicmeltingpattern.以04mutationsweres
7、creened,andthenverifiedbyDNAsequencing.Paired∥testwasusedforthecomparisonofthedetectionofmutations.ResultsThemeltingtemperaturesforrt204I,rt204Vandrt204Mwere58.0℃,60.6℃and62.5。C,respectively.Among185samples,168samples(90.8%)couldbeanalyzedbvHRMmethod,
8、and155samples(83.8%)coulebesuccessfullysequenced(P<0.01).Intlle155sanq【pleswhichwerecompletelyanalyzedbyHRMassayandsequencing,75sampleswerert204M,55sampleswerert204I.and25sampleswerert204VbyusingHRMmethod,withanoverallmutationdetectionrateof51
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