非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测HBV P区rt204位点耐药突变.pdf

《非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测HBV P区rt204位点耐药突变.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·200·主堡堕鏖璧鎏瘟苤查垫!!生!旦箜!鲞箜兰塑堡垒也￡g!i!!生!!望堡：垒!鲤塾兰!!!：!尘：鱼：№：堡·论著·非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测HBVP区rt204位点耐药突变毛雄英陈洁王卫华陈辉【摘要】目的建立一种基于非标记探针高分辨率熔解曲线技术(HRM)检测HBVP区以04位点耐药突变的方法。方法构建野生株rt204M、突变株rt204I和rt204V的质粒，设计、优化探针。利用质粒作为标准品建立HRM特征性解链图谱。收集2010年5月至2012年5月宁波大学附属医院诊治的18

2、5例慢性乙型肝炎患者外周血样本共185份，用HRM技术检测所有样本，并与特征性解链图谱比对，筛选出rt204位点的突变，再经基因测序验证。采用配对r检验比较两种方法的变异检出率。结果突变株rt204I、rt204V和野生株rt204M的熔解温度(Tm)分别为58．0。C、60．6℃和62．5。C；185份样本中，HRM技术成功分析168份(90．8％)，基因测序成功分析155份(83．8％)，二者差异有统计学意义(P<0．01)；同时被两种方法检出的155份临床样本中，非标记探针HRM技术检测到野

3、生株75份(rt204M)，变异株80份(55份rt204I、25份rt204V)，变异检出率为51．6％(80／155)；基因测序法检测到野生株110份(rt204M)，变异株45份(30份rt204I、15份rt204V)，变异检出率为29．0％(45／155)，两种方法差异有统计学意义(P<0．01)。结论非标记探针HRM技术是一种简单、灵敏、快速、特异的HBVP区以04位点耐药突变检测方法。【关键词】肝炎病毒，乙型；高分辨率熔解；非标记探针；聚合酶链反应；突变；rt204位点Highres

4、olutionmeltinganalysiswithunlabeledprobefordetectionofrt204mutationinHBVPgeneMAOXiong一一ng+，CHENJie，WANGWei—hua，CHENHui．+NingboInstituteofMedicalSciences，Ningbo315000，ChinaCorrespondingauthor：CHENHui，Email：chenhuinb@gmail．con【Abstract】ObjectiveToestabl

5、ishamethodofhighresolutionmeltinganalysis(HRM)withunlabeledprobefordetectionofrt204mutationinHBVPgene．MethodsPlasmidswithwildstrainrt204M．mutantstrainsrt204Iandrt204Vwereconstructed，andtheprobesweredesignedandoptimized．HRMDlotswereestablishedbythecons

6、tructedplasmids．Atotalof185sampleswerecollectedfrompatientswithchronichepatitisBintheAffiliatedHospitalofSchoolofMedicineofNingboUniversityduringMay2010andMay2012．AllsamplesweredetectedbyHRM，andmatchedwithcharacteristicmeltingpattern．以04mutationsweres

7、creened，andthenverifiedbyDNAsequencing．Paired∥testwasusedforthecomparisonofthedetectionofmutations．ResultsThemeltingtemperaturesforrt204I，rt204Vandrt204Mwere58．0℃，60．6℃and62．5。C，respectively．Among185samples，168samples(90．8％)couldbeanalyzedbvHRMmethod，

8、and155samples(83．8％)coulebesuccessfullysequenced(P<0．01)．Intlle155sanq【pleswhichwerecompletelyanalyzedbyHRMassayandsequencing，75sampleswerert204M，55sampleswerert204I．and25sampleswerert204VbyusingHRMmethod，withanoverallmutationdetectionrateof51