固相萃取-反相高效液相色谱法检测水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物.doc

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1、固相萃取-反相高效液相色谱法检测水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物孔雀石绿（MG）和结晶紫（CV）具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等特点，当其进入生物体内，就会产生具有更强危害的隐性孔雀石绿（LMG）和隐性结晶紫（LCV）。鉴于孔雀石绿和结晶紫的危害性，包括我国在内的许多国家都将它们列为水产养殖中的禁用药物。《GB/T19857-2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》和《SN/T1479-2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》中均采用有机溶剂提取后经固相萃取柱净化，然后采用高效液相色谱法或液相色谱

2、-串联质谱法测定。迪马科技在参考上述两个标准的基础上开发出中性氧化铝和阳离子交换固相萃取柱串联净化后，反相高效液相色谱柱检测。该方法准确可靠，重复性好，回收率高，可作为水产品中孔雀石绿和结晶紫及代谢物的检测方法。水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测(参考《SN/T1479-2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》和《GB/T19857-2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》)1适用范围本方法适用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测。2样品准备/提取1、称取已粉碎（已均质）的样品1g于15mL离心

3、管中，加入1mL0.05mol/L苯磺酸溶液、1mL0.25g/mL盐酸羟铵溶液、0.4mL0.1mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)和8mL乙腈，涡旋混合2min，4000rpm离心1min；2、将上清液转移至50mL离心管中，残渣按照步骤1重复提取一次；订购电话：北京：400-608-7719上海：021-61263966广州：020-85593520沈阳：024-22943513天津：400-633-6606青岛：0532-83725230成都：028-86612625南京：025-83479007石家庄：0311

4、-66686220重庆：023-65414656郑州：0371-63672790其他地区：400-633-66063、合并两次提取液，并加入6mL三氯甲烷和7mL水，涡旋混合1min，4000rpm离心1min；4、取下层清液于旋蒸瓶中，向上层清液加入6mL三氯甲烷，重复提取一次；5、合并两次下层三氯甲烷溶液，40℃减压蒸至近干，加入5mL乙腈待净化。3SPE柱净化——ProElutAl-N（1g/6mL）（Cat.#：65306）上层ProElutSCX（500mg/3mL）（Cat.#：63604）下层(1)活化：

5、加入10mL乙腈，流出液弃去；(2)上样：将待净化液加入小柱，流出液弃去；(3)淋洗：加入5mL乙腈淋洗小柱，流出液弃去，并去掉上层Al-N小柱；(4)洗脱：加入5mL5%氨水乙腈，收集洗脱液；(5)重新溶解：将洗脱液在40℃下减压蒸干，1mL定容液*溶解残渣，过微孔滤膜供HPLC分析。*定容液：乙酸铵缓冲液：盐酸羟铵溶液=2：1乙酸铵缓冲液：乙腈：0.05mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)=75:25；盐酸羟铵溶液：取1mL0.25g/mL盐酸羟铵溶液用水定容至100mL。4分析条件色谱柱：PlatisilODS，2

6、50x4.6mm，5μm（Cat.#99503）流速：1.0mL/min检测器：UV591nm和UV266nm柱温：30℃进样量：20μL流动相：A：乙腈B：0.05mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)梯度：时间/min05.511.011.0120B％28882828订购电话：北京：400-608-7719上海：021-61263966广州：020-85593520沈阳：024-22943513天津：400-633-6606青岛：0532-83725230成都：028-86612625南京：025-83479007石家

7、庄：0311-66686220重庆：023-65414656郑州：0371-63672790其他地区：400-633-66065添加回收结果分析物添加水平(mg/kg)回收率(%)RSD(n=4)%孔雀石绿1.0082.817.85结晶紫1.0098.601.39隐色孔雀石绿1.0095.462.73隐色结晶紫1.0090.031.315.1孔雀石绿和结晶紫检测图谱(UV591nm)1.孔雀石绿2.结晶紫5.2鳕鱼中孔雀石绿和结晶紫(添加水平1.0mg/kg)检测图谱(UV591nm)1.孔雀石绿2.结晶紫订购电话：北

8、京：400-608-7719上海：021-61263966广州：020-85593520沈阳：024-22943513天津：400-633-6606青岛：0532-83725230成都：028-86612625南京：025-83479007石家庄：0311-66686220重庆：023-65414656郑州：0371-636727