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1、第34卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第5期2006年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry663～667液相色谱法同时测定水产品中孔雀石绿和结晶紫残留3张志刚施冰陈鹭平林立毅周昱(厦门出入境检验检疫局,厦门361012)摘要用液相色谱2可见法同时测定水产品中孔雀石绿(MG)、结晶紫(CV)及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG)和隐色结晶紫(LCV)的残留量,并用液相色谱2串联质谱法进行确证和定量。样品用乙腈提取,二氯甲烷液液分配,MCX阳离子固相萃取小柱净化,浓缩定容。以乙酸铵缓冲溶液和
2、乙腈为流动相,经C18柱分离后,PbO2柱后衍生;用二极管阵列检测器在618nm测定孔雀石绿和隐色孔雀石绿,在588nm测定结晶紫和隐色结晶紫;并用串联质谱在电喷雾2多反应监测离子的模式下,进行质谱确证和定量;外标法定量,内标亮绿和氘代隐色孔雀石绿校正回收率。液相色谱2可见法的检出限为MG0.22,LMG0.28,CV0.22,LCV0.25μg/kg;液相色谱2串联质谱法的检出限为MG0.014,LMG0.018,CV0.014,LCV0.0084μg/kg。在2～20μg/kg范围内,回收率为75%～95%。关键词高效液相色谱
3、,液相色谱2串联质谱,孔雀石绿,隐色孔雀石绿,结晶紫,隐色结晶紫1引言孔雀石绿(malachitegreen,MG)和结晶紫(crystalviolet,CV)同属于碱性三苯甲烷类染料,具有类似的结构(见图1),在水产养殖过程中,常作为杀菌剂和抗寄生虫药,用于防治各种鱼病。该类物质在鱼[1]体内代谢为隐色孔雀石绿(LMG)和隐色结晶紫(LCV)(见图1),长期残留于生物体内。由于三苯甲烷具有致突变、致畸和致癌作用,欧美、中国和日本等宣布严禁在水产养殖中使用孔雀石绿和结晶紫,并规定孔雀石绿(含隐色孔雀石绿)和结晶紫(含隐色结晶紫)不
4、得检出。图1孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫和亮绿的分子结构Fig.1Chemicalstructureofmalachitegreen(MG),leucomalachitegreen(LMG),crystalviolet(CV),leucocrystalviolet(LCV)andbrilliantgreen(BG)国内外对水产品中孔雀石绿和结晶紫残留分析的报道主要集中在孔雀石绿和隐色孔雀石绿的测[2～8]定,有HPLC2VIS、HPLC2MS、HPLC2MS/MS等方法;关于结晶紫和隐色结晶紫测定的报道较少,仅有[2
5、,6,7][9]HPLC2VIS法、HPLC2MS法;同时测定孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物残留的HPLC2MS/MS方法在国内外均未见报道。本研究采用液相色谱2柱后衍生2可见法同时测定MG、LMG、CV、LCV残留量,并建立了串联质谱确证方法。实验表明,该方法的灵敏度和准确度较高,净化效果好,各项技术指标均符合残留分析的要求,可以满足各国的检测要求。2实验部分2.1仪器与试剂1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司),配有二极管阵列检测器(DAD);API3000串联四极杆质谱仪(美国ABI公司);T18型组织匀浆机(德国
6、IKA公司);固相萃取柱60mg/3ccWatersOasisMCX阳离子交换柱。孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、亮绿为Sigma公司试剂;氘代隐色孔雀2005207203收稿;2005212220接受©1994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net664分析化学第34卷石绿D62LMG(Bis2(42dimethylamino2phenyl)2phenyl2D52methane2D
7、1)购自WITEGA,用乙腈分别配制成100mg/L标准贮备液;乙腈、甲醇为色谱纯(Merck试剂);实验用水为Millipore超纯水;其它试剂为分析纯(上海试剂厂)。2.2样品处理2.2.1提取准确称取5.00g样品于100mL离心管中,加入50μL内标BG和D62MG(1mg/L),加入1mL盐酸羟铵(0.25g/mL)、1mL对甲苯磺酸(0.05mol/L)、2mL乙酸铵溶液(0.1mol/L乙酸铵,冰乙酸调pH4.5)和40mL乙腈,均质2min(10000r/min),离心3min(3000r/min),将上清液转移到
8、250mL分液漏斗中,用20mL乙腈重复提取残渣一次,合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷,35mL水,振摇1min,静置分层,收集下层有机层于150mL梨形瓶中,再用20mL二氯甲烷萃取一次,合并二氯甲烷层,45℃减压旋转蒸发至干。2.2
