固相萃取-反相高效液相色谱法检测乳粉叶酸的研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：09440DissertationfortheDegreeofMasterDeterminationofFolicAcidinMilkPowderbySPE--RP·-HPLCCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：DanShiAssociate

2、Prof．YihongBaoProf．QinghaiShengMasterFoodScienceandEngineeringNortheastForestry万方数据摘要本研究采用超声波萃取、高氯酸溶液除蛋白、固相萃取技术净化、高锰酸钾衍生后利用高效液相色谱法检测，对乳粉中叶酸含量的检测方法进行了研究。旨在建立一种快速、准确检测乳粉中叶酸含量的新方法。通过对实验条件的探讨研究，建立了检测乳粉中叶酸含量的方法，其具体操作步骤如下：(1)样品前处理：准确称取乳粉样品59(精确到O．00019)于50

3、mL锥形瓶中，加30mL去离子水(40"--50℃)溶解，置于50℃超声波振荡器中进行超声萃取15min，再加入60％的高氯酸1．5mL沉淀蛋白质，沉淀完全后将溶液全部转移至50mL容量瓶中，加去离子水定容至刻度，摇匀，4000ffmin离心15min，清液用滤纸过滤至锥形瓶中后放入O~4℃冰箱备用。(2)固相萃取净化：①先用5mLl00％甲醇活化萃取柱，加入5mL水冲洗去甲醇，并使小柱平衡，上样前勿让填料流干；②取5mL样品清液加到柱床上，用Waters固相萃取仪控制流速在40d／min，使样

4、品流过填料；③待样液全部通过固相萃取柱后，用6mL1％的去离子水将干扰物洗出；④最后用5mL100％甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，保存备用。(3)衍生方法：用lmL水复溶经氮气吹干的样品，涡旋振荡使其全部溶解；向其中加lmL0．29／100mL高锰酸钾衍生剂、lmL0．1mol／L的氢氧化钠；币1]2mL去离子水，涡旋振荡使其充分混匀。然后放入60。C水浴加热40min。取出用自来水冲洗冷却，经涡旋振荡后用有机系针头式滤膜过滤到自动进样瓶中，上机备用。(4)色谱检测条件：色谱柱：BDSHYPE

5、RSILC18(250×4．6mmi．d．51xrn)；柱温为30℃；检测器为荧光检测器，检测波长：E为285nm，厶为437nm；流动相为0．1mol／L磷酸二氢钠溶液；流速lmL／min；进样量20p,L。在上述实验条件下，方法在0．005～1．5}tg／mL范围内有良好的线性关系，相关系数可以达到0．9997，该方法的最低检出限为0．005p,g／mL，定量限为0．017I，tg／mL。当添加浓度在40～100“g／lOOmg时，方法的平均回收率为89．9％94．2％，RSD％为1．05-

6、1．47％。实验结果表明，应用本方法检测婴幼儿配方乳粉中的叶酸，具有操作简单、精密度高、准确度好、容易推广等优点。方法可以满足乳品企业检测乳粉中叶酸含量的要求。关键词叶酸；婴幼儿配方乳粉；反相高效液相色谱；固相萃取万方数据东北林业大学硕士学位论文AbstractUltrasonicextraction，highchlorineacidsolutiontoremoveprotein，solidphaseextractiontechnologypurificationandHPLCmethodswe

7、reappliedfordeterminationoffolioacid(FA)contentinmilkpowder．Aimedatestablishingarapidandaccuratedeterminationoffolicacidcontentinmilkpowder．Throughtheresearchonexperimentalconditions，establishingthemethodthatdetectthecontentoffolicacidinmilkpowder,sp

8、ecificoperatingprocedureisasfollows：(1)Ssamplepretreatment：59milksamplesweretakenexactly(accurateto0．0001g)in50mLconicalbeaker；add30mLdeionizedwater(40-50。C)dissolve；ultrasonicoscillatorextractionfor15minin50。Ccondition；add60％ofhighchlorineacid1．5mLf