固相萃取反相高效液相色谱荧光检测法测定拟南芥中的生长素论文

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1、固相萃取反相高效液相色谱荧光检测法测定拟南芥中的生长素论文符继红褚金芳王吉德闫存玉【摘要】建立了固相萃取反相高效液相色谱荧光检测法测定拟南芥中生长素的方法。采用S)和液相色谱质谱联用(LCMS)技术。但是GCMS方法要求样品的衍生化以提高挥发性和灵敏度，样品处理过程复杂费时。LCMS/MS技术虽然有较高的灵敏度和选择性，同位素内标物的使用使其定量更为准确3～7。但由于仪器和内标物的昂贵，限制了该方法的广泛应用。高效液相色谱(HPLC)是一种通用的分析仪器，其在植物激素测定研究中已有报道，但因生物体内激素的复杂性与特殊性，使其有效成分的提

2、取分离成为极为关键的一步。HPLC法测定多种植物内源激素时经常发生分离差、峰型不良及严重拖尾现象8，且样品用量一般要求较多9,10，对一些特殊样品无法实现测试要求。因此，选择合适的植物激素提取方法和色谱条件尤为重要。本研究建立的固相萃取高效液相色谱(HPLC)荧光检测法可以准确测定植物中的生长素类物质，样品用量少，可以满足普通分析实验室完成相关测试的要求。拟南芥(Arabidopsisthaliana)属被子植物，双子叶分纲，属十字花科。因其具有生命周期短、自花授粉、核基因组小，结构简单等优点，是植物细胞遗传学研究的经典模式材料11。建立拟南芥

3、中植物激素生长素含量的测定方法对有关生长素作用机制及信号转导途径的研究具有重要意义。2实验部分2.1仪器与试剂2695高效液相色谱仪(美国K2超纯水仪(ELGA公司)制备的超纯水;拟南芥(中科院遗传与发育生物学研究所种植，生长期12d，长日照，16h光照，8h黑暗。温度21～23℃，湿度50%～60%，光照强度80～120μmol/(s·m2)。2.2实验方法2.2.1标准溶液的配制根据拟南芥中生长素含量范围确定标样浓度9。准确称取0.05357g吲哚乙酸和0.06458g吲哚丙酸，用80%甲醇溶解并定容至25mL，配制成2.14g/L吲哚乙酸

4、和2.58g/L吲哚丙酸标准溶液。相应低浓度生长素标准液用80%甲醇稀释而成。2.2.2色谱条件S是研究IAA使用最广泛的分析仪器，但样品处理要经过繁琐的纯化和衍生过程13,14，处理过程中样品损失量很大，不利于建立高通量的生长素测定方法。寻找一种快速、灵敏度高，成本低的方法，以期能在短时间内处理多个样品非常必要。与传统的GCMS定量分析方法相比15,.freelolecularBiologyofPlants，Rockville，MD，AmericanSocietyofPlantBiologists，2000：8502YangShiJie(

5、杨世杰主编).PlantBiology(植物生物学).Beijing(北京)：SciencePress(科学出版社)，2000：2243MüllerA，DüchtingP，urchSJ，O′BrienR，SaxenaPK.J.Chromatogr.A，2006，1134：333～3376PanX，aZ，GeL，LeeASY，YongJodernMethodsofPlantAnalysis:Neany,1987：72～9113VineJH，NoitonD，PlummerJA，BaleriolaLucasC，MullinsMG.PlantPhys

6、iol.，1987，85：419～42214KambojJS，BrosSR，AmbroseSJ.PlantJ.，2003，35：405～41717BirkemeyerC，KolasaA，KopkaJ.J.Chromatogr.A，2003，993：89～102