浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶的克隆与表达.pdf

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1、46中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemica!Pharmaceutics2012年第33卷第1期浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶的克隆与表达王晓玉，刘飞，颜震，张莉，朱希强，郭学平，凌沛学，(1。山东大学药学院，山东济南250012：2．山东省药学科学院生物技术中心，山东济南250101)摘要：目的获取浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶基因并在大肠杆菌中表达。方法构建浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶表达质粒，转化大肠杆菌DH5d，筛选获得阳性重纽茵株。经42℃诱导后，检测酶活性。结果浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶在大肠杆菌中成功表迭，表达量迭3U／m

2、L。结论浸麻芽孢杆菌环糊精葡糖基转移酶可以在大肠杆菌中高效表达。关键词：环糊精葡糖基转移酶；浸麻芽孢杆茵；表达；大肠杆菌中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1005．1678(2012)O1-0046-03CloneandexpressionofeyelodextringlycosyltransferasefromBacillusmaceransinEscherichiacoliWANGXiao-yu'，LIUFei，YANZhen，ZHANGLi，ZHUXi．qiang，GUOXue．ping，LINGPei—xue'(1．SchoolofPharmaceuti

3、calScience，ShandongUniversity，Jinan250012，China；2．BiotechnologyCenter，ShandongAcademyofPharmaceuticalScience，Jinan250101，China)Abstract：PurposeToobtainthegeneofcyclodextringlycosyltransferasefromBacillusmaceransandtoexpressitinEscherichiacoli．MethodsTheexpressionplasmidofcyclodextringlyc

4、osyhransferasefromBacillusmaceranswasconstructed，thenitwastransferredintoEscherichiacoliDH5ct，andpositivecloneswereobtainedbyscreening．Afterinduction，theenzymeactivitywasdetected．ResultsThecyclodextringlycosyhransferasefromBacillusmaceranswassuccessfullyexpressedinEscherichiacoli，andthee

5、nzymeactivitywas3U／mL．ConclusionThecyclodextringlycosyhransferasefromBacillusmaceranscanbeex—pressedeficientlyinEscherichiacoli．Keywords：cyclodextringlycosyhransferase；Bacillusmacerans；expression；Escherichiacoli环糊精葡糖基转移酶(CGTase，EC2．4．1．19)CGTase产量和活性。因此，基因工程方法生产CG-是仅．淀粉酶家族的重要成员，能将淀粉通过环化反

6、Tase越来越得到重视。目前已有利用大肠杆菌(E．应转化为环糊精⋯，且还可通过逆反应将环糊精与coli)表达CGTase的报道，但多为包涵体，活性不高。维生素c结合生成维生素c葡糖苷。环糊精在本研究将浸麻芽孢杆菌(Bacillusmacerans)的CG—食品、医药、农业、纺织、环保和分析化学等领域具有Tase插入高效表达载体pBV220，对其表达情况进行广泛的应用，维生素C葡糖苷也是化妆品生产领研究。域重要的原料之一。环糊精和维生素C葡糖苷1材料的工业化生产均采用酶法合成，但由于野生菌株的1．1茵株和质粒产酶能力普遍较低，CGTase的产量远不能满足工业Bacillu

7、smacerans为革兰阳性菌购自中国工业化生产的要求，其应用受到了很大限制，必须提高微生物菌种保藏中心；E．coli、DH5克隆载体pUC19[Amp(氨苄青霉素)抗性]和表达载体pBV220(Amp抗性)均为山东省药学科学院生物技收稿日期：2010．11．23术中心保存。基金项目：“泰山学者”建设工程专项经费资助1．2工具酶和试剂(盒)作者简介：王晓玉，女，硕士研究生，微生物与生化药学专业，E—mail：xiaoyuw26@hotmait．corn；凌沛学，通信作者，研究员，博士生导T4连接酶、限制性内切酶、Taq酶和Probest高