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《解淀粉芽孢杆菌bamhi甲基转移酶基因克隆、功能鉴定与序列分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2009年第11期解淀粉芽孢杆菌BamHI甲基转移酶基因克隆、功能鉴定与序列分析1,21,21,21,2刘洋沈微石贵阳王正祥(1江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122;2江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心,无锡214122)摘要:从解淀粉芽孢杆菌BaillusamyloliquefaciensCICIMB2125中克隆了BamHI甲基转移酶基因(bamHIM),并在大肠杆菌JM109中得到了成功表达。该基因含有1271bp的开放阅读框(ORF),编码423
2、个氨基酸,成熟蛋白分子量为49kD。该基因在自身启动子引导下,表达了具有活性的BamHI甲基转移酶(M.BamHI)。该酶可以将BamHI位点的碱基甲基化。氨基酸序列分析表明该酶存在有NADB_Rossmann结构域。关键词:解淀粉芽孢杆菌BamHI甲基转移酶序列分析Cloning,ExpressionandNucleotideSequenceAnalysisofGeneEncodingforBamHIMethyltransferasefromBaillusamyloliquefaciensCICIMB21251,21,21,21,2LiuYangShenWe
3、iShiGuiyangWangZhengxiang1(TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,JiangnanUniversity,Wuxi214122;2CenterforBioresource&Bioenergy,SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversity,Wuxi214122)Abstract:AgeneencodingforBamHImethyltransferase(bamHIM)wasclonedfromBaillusamylo
4、liquefaciensCICIMB2125.ThebamHIMwasexpressedunderitsownpromoterinE.coliJM109.Thegenecontainedanopeningreadingframe(ORF)of1271bp,whichcodedfor423aminoacidresidues.Themolecularweightofmatureproteinwas49kD.TheBamHIsitecouldbemethylasedbytheenzymeM.BamHI.Theaminoacidsequenceanalysisreve
5、aledthattheenzymecontainedadomainofRossmann2foldNAD(P)(+)2bindingproteins.Keywords:BaillusamyloliquefaciensBamHImethyltransferaseSequenceanalysis[6][7～9]DNA甲基转移酶是一类以S2腺苷酰甲硫氨酸枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌都存在着特为甲基供体,以DNA胞嘧啶为受体(也有以DNA腺异的甲基转移酶及限制内切酶。嘌呤为甲基受体)的甲基转移酶类,可以将特定位解淀粉芽孢杆菌(Baillusamyloliquefacie
6、ns)为革点的碱基甲基转移,有明显的序列专一性和组织专兰氏阳性,杆状细菌与枯草芽孢杆菌具有很近的亲[1][10]一性。其广泛存在于生物体内,对于保护识别自缘关系。它具有较强的胞外酶分泌能力,是淀粉身DNA,识别外源DNA,保持种的稳定和遗传多样酶、蛋白酶和β2糖苷酶的等一些主要酶制剂的生产[1,2][11]性及对基因的表达调控起着重要作用。在大部菌株。同时,一些解淀粉芽孢杆菌可以分泌抑菌分微生物中都存在DNA甲基转移酶,它与限制性内素,抑制植物上的多种病原真菌,也是用于生物防治[3～5][2][12～14]切酶组成限制2修饰系统(RM)。大肠杆菌、的理想菌株。
7、由于B.amyloliquefaciens体内存收稿日期:2009206229基金项目:新世纪优秀人才支撑计划(NCET20420497),国家“863”项目(2006AA020204)作者简介:刘洋(19752),男,新疆克拉玛依人,博士,研究方向:工业微生物;E2mail:liuyang_07@126.com通讯作者:王正祥,男,教授;E2mail:zxwang@jiangnan.edu.cn66生物技术通报BiotechnologyBulletin2009年第11期在特有的限制修饰系统,使得菌株较为稳定,不易受II连接,构建克隆pSK2met转化大肠杆菌
8、JM109感受到外界DNA的侵染,但同
