分子生物学试剂配方.doc

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1、LB液体培养基：baco-tryptone10gbacto-yeastextract5gNaCl10g搅拌完全溶解，用氢氧化钠10M调pH7.0，定溶1L，灭菌。LB固体培养基：LB液体培养基临高压灭菌前加入15g琼脂。氨苄青霉素：贮存液50mg/ml（水），过滤除菌，避光保存-20oC，用时取50微升加入50毫升培养基。0.5MEDTA（pH8.0）：160毫升h2O+EDTA-Na-2h2O（37.22g），磁力搅拌，用氢氧化钠（约4克颗粒）调pH8.0，定溶至200ml。分装高压灭菌。1MTris.HCl（pH8.0）：

2、160毫升h2O+24.22gTris碱，加入浓HCl8.4毫升后冷却至室温，调pH8.0，定溶至200ml。分装高压灭菌。1.5MTris.HCl（pH8.8）：160毫升h2O+36.33gTris碱，加入浓HCl？毫升后冷却至室温，调pH8.8，定溶至200ml。分装高压灭菌。1MTris.HCl（pH6.8）：160毫升h2O+24.22gTris碱，加入浓HCl？毫升后冷却至室温，调pH6.8，定溶至200ml。分装高压灭菌。10%SDS：90毫升h2O溶解10gSDS（加热68oC助溶），加入几滴浓HCl调pH7.

3、2，定溶至100ml，分装无须灭菌提取质粒溶液1：200毫升无水葡萄糖1.8g1MTris.HCl（pH8.0）5ml0.5MEDTA（pH8.0）4ml定溶至200ml，灭菌，4oC保存提取质粒溶液2（现用现配）：10%SDS1ml10MNaOH200微升水8.8ml提取质粒溶液3：200毫升KAc58.884g冰乙酸23ml定溶至200ml，灭菌，4oC保存TE：1MTris.HCl（PH8.0）1ml（灭菌）0.5MEDTA（PH8.0）200微升（灭菌）定溶100mlIPTG：8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后定溶至10

4、ml，0.22um滤器过滤除菌，分装，-20oC保存。X-gal：用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的贮存液，保存时防光破坏，-20oC保存，无须过滤除菌。氨苄青霉素（Amp母液）：50mg/ml。终浓度：50ug/ml。3MNaAc（pH5.2）：50毫升h2O+24.61g无水NaAc或20.405gNaAc-3h2O，冰乙酸调pH5.2，定溶至100ml。分装高压灭菌。3MNaAc（pH7.0）：50毫升h2O+24.61g无水NaAc或20.405gNaAc-3h2O，稀乙酸调pH7.0，定溶至100ml

5、。分装高压灭菌。2XSDS凝胶加样缓冲液*：50ml（1MDTT：用20ml0.01M的NaAc（PH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌分装-20oC保存），含DTT的溶液不宜高压处理。1MTris.HCl（PH6.8）5ml0.1g溴酚蓝10g甘油10%SDS20ml1MDTT10ml加水5ml不含DTT的2XSDS凝胶加样缓冲液可室温保存，临用前加入。50XTAE；24.2gTris5.71ml冰乙酸10ml0.5MEDTA（pH8.0）定溶100ml。10XPBS：500ml400ml蒸馏水+40gNaCl+1gKC

6、l+7.2gNa2HPO4（或者18.14gNa2HPO412h2O）+1.2gKH2PO4，用HCl调pH7.2，定溶，灭菌，室温保存。凝胶加样缓冲液：0.25％溴酚蓝＋0.25％二甲苯青FF＋40％（w/v）蔗糖水溶液【或者30％甘油水溶液】