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1、附录A试剂和培养基配方1.稀释液木规范屮的稀释液包括：胰蛋白豚生理盐水溶液（TPS）、磷酸盐缓冲液（PBS,0.03mol/L,pH7.2）、中和剂溶液、标准硬水（硬度342mg/L）、生理盐水等1.1胰蛋白腺生理盐水溶液（TPS）胰蛋白豚l.Og氯化钠8.5g先用900mL以上蒸憎水溶解，并调节pll值在7.0±0.2（20°C）,最终用蒸催水加至lOOOmL,分装后，经121°C压力蒸汽火菌后使用。1・2磷酸盐缓冲液（PBS,0.03mol/L,pH7.2）无水磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾1.36g蒸憎水加至lOOOmL将各成分加入到lOOOmL蒸催水屮，待完全
2、溶解后，调pH至7.2,于121°C压力蒸气火菌20min备用。1.3标准硬水（硬度342mg/L）氯化钙（CaCl2）氯化镁（MgCl2・6H2O）蒸馆水加至lOOOmL0.304g0.139g将备成分加入到lOOOmL蒸憎水中，待完全溶解后，于12PC压力蒸气灭菌20min备用。1.4生理盐水氯化钠蒸IS水加至8.5glOOOmL将氯化钠加入到lOOOmL蒸馅水屮，待完全溶解示，于121°C压力蒸气灭菌20min备用。2.革兰染色液笫1液：结晶紫溶液结晶紫乙醉饱和溶液100ml,结晶紫4g〜8g95%乙醉100mL1%草酸胺溶液第2液：卢戈硕液碘化钾2g碘lg蒸憎
3、水200mL第3液：脱色剂（1）95%乙醇（2）丙酮乙醇溶液lOOmL95%乙醉70mL丙酮30mL第4液：稀释石炭酸复红液碱性复红乙醇饱和溶液10mL碱性复红5g~10g5%石炭酸溶液90mL蒸憎水900ml,1.孔雀绿与沙黄芽抱染色液第1液5.00%孔雀绿水溶液笫2液0.5%沙黄水溶液2.有机干扰物牛血清白蛋白30g或3g蒸饱水lOOOmL溶解后用微孔滤膜（孔径为0.45pm）滤过除菌，冰箱保存备用3.营养琼脂培养基蛋白腺10g牛肉膏5g氯化钠5g琼脂15g蒸馆水lOOOmL除琼脂外其他成份溶解于蒸镭水屮，调pH至7.2~7.4,加入琼脂，加热溶解，分装,于121
4、°C压力蒸汽火菌20min备用。7.营养肉汤培养基蛋白豚10g牛肉膏5g氯化钠5g蒸彳留水lOOOmL将各成份溶解于蒸镭水屮，调pH至7.2〜7.4,分装，于121°C压力蒸汽灭菌20min备用。8•胰蛋白豚大豆肉汤培养基(TSB)胰蛋白月东1.5%(g/100mL)大豆蛋白腺0.5%(g/100mL)氯化钠0.5%(g/100mL)用蒸徭水配制而成，调节pH为7.2±0.2,经121°C压力蒸汽灭菌后使用。9•胰蛋白腺大豆琼脂培养基(TSA)胰蛋白腺1.5%(g/100mL)大豆蛋白豚0.5%(g/100mL)氯化钠0.5%(g/100mL)琼脂1.6%(g/lOO
5、iriL)用蒸僧水配制而成，调节pll为7.2±0.2,经121°C压力蒸汽灭菌后使用。10.品红亚硫酸钠培养基蛋白月东log酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂15g〜20g磷酸氢二钾3.5g无水亚硫酸钠5g5%碱性品红乙醉溶液20mL蒸镭水lOOOmg以上备成分蒸催水溶解，调pll至7.2〜7.4,装瓶，经121°C压力蒸汽灭菌后使用。11•漠甲酚紫蛋白陈培养液蛋白豚10g葡萄糖7.5g蔗糖2.Og可溶性淀粉1.5g1瞬臭甲酚紫乙醇溶液1.3mL蒸镉水至lOOOmL将蛋白腺、葡萄糖、蔗糖溶解于蒸镭水屮，调pH至7.2〜7.4,加入1%漠甲酚紫乙醉溶液，摇匀后，分装
6、每管5mL,于115°C压力蒸汽灭菌30mino置4°C冰箱备用。12.嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基蛋白豚10g牛肉膏可溶性淀粉lg匍萄糖lg琼脂20g蒸锢水lOOOmL以上各成分蒸镭水溶解，调pH至7.0〜7.2,装瓶，经115°C压力蒸汽灭菌30min后使用。13.沙堡琼脂培养基葡萄糖40g蛋白腺10g琼脂20g蒸镉水lOOOmL将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5.6±0.2,于115°C压力蒸汽灭菌30min备用。14.沙堡液体培养基葡萄糖40g蛋白豚10glOOOmL蒸僧水将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5.6±0.2,于115°C压力蒸汽灭
7、菌30min备用。15・麦芽浸膏琼脂培养基(MEA)麦芽浸膏30g3g大豆蛋白月东琼脂15g双蒸镭水加至lOOOinL将上述成分制成溶液与121°C,15min灭菌,灭菌后无菌调节pH至6.9±0.2备用。16・麦芽浸膏肉汤养基(MEB)麦芽浸膏30g双蒸徭水加至lOOOmL将上述成分制成溶液与121°C,15min灭菌，灭菌肩无菌调节pH至5.6±0.2备用17.人淋巴细胞维持培养基1640干粉培养基10X10.4gL谷氨酰胺2.93g丙酗酸钠1.004g青霉素80万单位链霉素100万单位碳酸@钠20.0gHopes23.9g去离了水加至lOOOO
