试剂与培养基配方

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1、PDA培养基马铃薯去皮200g，切成小块，加水煮烂，纱布过滤，加入15g葡萄糖加热，加琼脂20g，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，搅拌均匀，稍冷却后补纯水定容至1000mL，121℃高压灭菌20min，室温保存。0.5MTris-Cl(PH8.0)Tris30.25g，纯水400mL，先加入8mL浓盐酸，待溶液冷却至室温后再缓慢加入浓盐酸直至PH值到8.0，加纯水定容至500mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。0.5MTris-Cl(PH7.0)Tris30.25g，纯水400mL，浓盐酸20mL，

2、冷却至室温后缓慢加入浓盐酸调节PH值到7.0，加纯水定容到500mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。0.5MEDTA(PH8.0)EDTANa2·2H2O93.06g，纯水400mL，NaOH10g，再用NaOH溶液缓慢调节PH值到8.0，加纯水定容至500mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。TE缓冲液配方0.5MTris-Cl(PH8.0)10mL，0.5MEDTA(PH8.0)1mL，加纯水定容至500mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。CTAB抽提液CTAB20g，0.5MTri

3、s-Cl(PH8.0)200mL，0.5MEDTA(PH8.0)40mL，NaCl81.8g，加纯水定容至1L，121℃高压灭菌20min，室温保存。3M醋酸钠(PH5.2)NaAc·3H2O40.8g，纯水70mL，溶解后加入冰醋酸调节pH值至5.2，加纯水定容至100mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。RNase(10mg/ml)配方RNA酶100mg，TE10mL，沸水浴20min，分装于2mL离心管-20℃保存。TB3培养基YeastExtract3g，酸水解酪蛋白3g，蔗糖200g，补纯水定

4、容至1L，121℃高压灭菌20min，4℃保存。STCbuffer蔗糖100g，0.5MTris-Cl(PH8.0)50mL，CaCl2·2H2O3.6755g，补纯水定容至500mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存。PTCPEG800040g，补STC溶液到100mL，溶解后用细菌过滤器除菌过滤，4℃保存。1.2MKCl溶液称量KCl固体89.46g并补水到1L，溶解后121℃高压灭菌20min，4℃保存。BottomAgar和TopAgarYeastExtract3g，酸水解酪蛋白3g，蔗糖200g

5、，补水到1L，BottomAgar和TopAgar加入琼脂的量分别为10g/L和15g/L，121℃高压灭菌20min，室温保存。酶解液称取崩溃酶0.5g，溶壁酶0.1g，20mL1.2mol/LKCl，30℃，90rpm震荡培养30min，离心3500rpm，10min，用细菌过滤器过滤，4℃保存。2.5MHCl86.2mLHCl，用超纯水定容至400mL。变性液NaCl87.6g，NaOH20g，加超纯水定容至1000mL，121℃灭菌20min。中和液(pH7.6)Tris60.57g，NaCl87.6

6、g，加入约800mL的超纯水，用浓HCl调节pH至7.6，加超纯水定容至1000mL，121℃灭菌20min。20×SSC(pH7.0)二水合柠檬酸钠88.2g，NaCl175.3g，加入约800mL的超纯水，用浓HCl调节pH至7.6，加超纯水定容至1000mL，121℃灭菌20min。转膜时需要用超纯水稀释成10×SSC。5×SSC量取250mL20×SSC，用超纯水定容至1000mL。0.5×SSC，0.1%SDS量取100mL5×SSC，用超纯水定容至1000mL，然后加入0.5gSDS，充分混匀。杂

7、交缓冲液将64mL超纯水分两次缓慢加入地高辛杂交颗粒(7号瓶)中，在37℃条件下搅拌至缓冲液完全澄清。马来酸缓冲液称取马来酸11.6g，NaCl8.76g，加入800mL纯水中，用NaOH(固体)调节pH至7.5(20℃)，定容至1000mL，121℃灭菌20min。洗涤缓冲液称取马来酸11.6g，NaCl8.76g，加入800mL纯水中，用NaOH(固体)调节pH至7.5(20℃)，然后加入3mLTween20，定容至1000mL，121℃灭菌20min。检测缓冲液称取NaCl5.844g，Tris12.1

8、14g，溶解于800mL纯水中，用2.5MHCl调节pH至9.5(20℃)，定容至1000mL，121℃灭菌20min。封阻溶液用1:10的比例用马来酸缓冲液将10×封阻液(6号管)稀释成1×工作溶液。抗体溶液每次使用之前将原始管中的anti-digoxigenin-AP(4号管)1000rpm离心3min，从表面小心吸取所需用量，用封阻液按1:5000(150mU/mL)的比例稀释。YPDYeas