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1、第九章微生物实验室常用试剂与培养基第一节常用试剂及其使用方法一、诊断用纸片1.杆菌肽纸片（0.04U/片），抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株A群链球菌阳性D群链球菌阴性2.SMZ纸片（1.25μg/23.75μg/片），出现抑菌圈即为敏感。质控菌株D群链球菌阳性A群链球菌阴性3.新生霉素纸片（5.0μg/片），抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株表皮葡萄球菌阳性腐生葡萄球菌阴性4.O129纸片、奥普托欣（Optochin）纸片参见第五节《生化试验培养基》。二、诊断用血清1.沙门菌属诊断血清A-F群O多价血清特异O群因子血清常用的有O2，O4，O7，O9，O10特异H因子血清常用的有Ha，Hb，
2、Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子血清。2.志贺菌属诊断血清志贺菌属四种多价血清（含有痢疾志贺、福氏、宋内志贺）痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清。福氏志贺菌多价血清及分型血清（1-6型）。宋内志贺菌诊断血清（除光滑相抗血清外，能制备粗糙相抗血清）。鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。3.致病性大肠埃希菌诊断血清肠致病性大肠埃希菌（EPEC）诊断血清。产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）诊断血清。肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）诊断血清。肠出血性大肠埃希菌（EHEC）诊断血清O157：H7。4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清。5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清。6.链球
3、菌分类诊断血清。7.肺炎链球菌诊断血清。8.耶尔森菌诊断血清。三、常用染色液(一)革兰染色液1.结晶紫溶液A液结晶紫20g95%乙醇20mlB液草酸铵0.8g蒸馏水80ml需在用前24小时将A液.B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。2.碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。3.脱色液95%乙醇4.复染液A贮存液沙黄2.5g95%乙100mlB应用液:A液10ml蒸馏水90ml(二)抗酸染色液1．碱性复红染色液(1
4、)萋纳石炭酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液10ml5%石炭酸溶液90ml(2)脱色液浓盐酸3ml95%乙醇97ml(3)复染液(吕弗勒美蓝液)美蓝乙醇饱和溶液30ml100g/L氢氧化钾0.1ml蒸馏水100ml2.金胺0-罗丹明B染色液(1)罗丹明B液罗丹明B0.1g加蒸馏水100ml。(2)1g/L金胺O液金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸5ml,混匀。(3)3%盐酸酒精(4)稀释美蓝液吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。(三)鞭毛染色液(改良Ryu法)A液5%石炭酸10ml鞣酸2g饱和硫酸铝钾液10mlB液结晶紫酒精饱和液应用液A液10份,B液1份,混合,室温
5、存放备用。(四)异染颗粒染色液甲液甲苯胺蓝0.15g孔雀绿0.2g95%乙醇2.0ml蒸馏水100ml乙液碘2g碘化钾3g蒸馏水300ml先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再中入碘,使完全溶解后,加蒸馏水至300ml。(五)荚膜染色液1．印度墨汁或50g/L黑色素水溶液2．5g/L苯胺兰水溶液第二节基础培养基一、液体基础培养基(一)蛋白胨水(Peptonewater)用途1.供细菌靛基质试验用。2.一般细菌培养和传代。配法蛋白胨（或胰蛋白胨）10gNacl5g蒸馏水1LpH7.2将上述成分溶于水中，校正pH,分装试管，每管2~3ml，置121℃灭菌15min备用。
6、质量控制大肠埃希菌生长良好，靛基质阳性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴性。(二)营养肉汤(Nutrientbroth)用途供一般细菌的增菌培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。配法蛋白胨10g牛肉膏3gNacl5g蒸馏水1LpH7.4将上述成分称量混合溶解于水中，校正pH，按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min，作无菌试验后冷藏备用。质量控制金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。保存置冰箱3周内用完。(三)牛肉浸液培养基用途细菌培养最基础的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。配法新鲜除脂牛肉500gNacl5g蛋白胨10g蒸馏水1L
7、pH7.4~7.61.先将牛肉清洗，除脂肪、肌腱，并切块绞碎。称取500g置容器加入蒸馏水1L，搅匀后置冰箱过夜，次日煮沸加热30min，并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤，再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10g、氯化钠5g溶解后，用NaOH溶液矫正pH至7.6~7.8，并加热煮沸10min，补充蒸馏水至1L，最后用滤纸过滤，呈清晰透明、淡黄色液体，经121℃15min灭菌备用。2.根据用途不同可以制成营养肉汤
