荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌.pdf

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1、食品安至与楦溺食品科技IFOoDSC-ENCEANDTECHNoLoGY2o14年第3蜷第O蛹荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌黄秀丽’，章丽，奉夏平，肖性龙，余以刚(1．广东省惠州市质量计量监督检测所，惠州516000；2．华南理工大学轻工与食品学院，广州510640)摘要：以sa442为靶基因，结合特异性引物，建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(~分辨率熔解曲线real—timePCR法，对该法进行特异性验证，敏感性分析及重复性评价，并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明，该方法

2、具有较强的特异性，对8株金黄色葡萄球菌目标菌株均产生特异性溶解曲线，rrm值为(77-34±0．287)℃，而沙门氏菌、单增李斯特茵、大肠杆菌O157等8种肉产品中常见的食源性非目标病原茵均不产生扩增曲线；灵敏度高，该法对阳性重组质粒PMD18一sa442的检测限为2．O0X10copies／mL；重复性强，同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为(0．76±0．52)％和(1．34-4-0．45)％；且该法可初步应用于人工染茵鸡肉样(染茵量5、l0、20cfu／25g样品匀浆)的检测。所建立的金黄色葡萄球菌HRMreal-timePCR法

3、具有特异性好、灵敏度高、重复性强的特点，能应用于食品样本的检测，为金黄色葡萄球茵的快速检测提供了新的方法。关键词：金黄色葡萄球菌；sa442基因；高分辨率熔解曲线；检测；荧光PCR中图分类号：TS207．4文献标志码：A文章编号：1005—9989(2014)03—0288—07RapiddetectionofStaphyIOcOccusaureusbyreal—timePCRusinghighresolutionmeltingcuryeanalysisHUANGXiu-li，ZHANGLi，FENGXia—ping，XIAOXing—lo

4、ng，YUYi—gang。(1．HuizhouQuanlityandMeasuringSupervisionTestingInstitute，Huizhou516000；2．CollegeofLightIndustryandFoodSciences，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510640)Abstract：Arapidreal—timePCRmethodfordetectingStaphyIococcusaureus(SA)byhighresolutionmeltingcurvean

5、alysis(HRM)wasdeveloped．Apairofspecificprimerswasdesignedtargetingthesa442geneofSA．Afteroptimizingtheconditions，thespecificityofthemethodwasvalidatedwith8targetSAstrainsand8non—targetstrains．ThesolutionswithdifferentcopiesofpurifiedrecombinantplasmidsPMD18-sa442wereanalyze

6、dbytheHRMrea1．timePCRmethodtoevaluateitssensitivity．Thereproducibilityofthemethodwasalsoevaluated．Themethodwasalsoappliedtodetectartificially．inoculatedchickensamplesaddedwith5，10，20cfu／25gStaphVIOcOccusaureus．Theresultsshowed收稿El期：2013—08—04通讯作者基金项目：惠州市科技计划项目(003193914071

7、2048)；广东省科技计划项目(2011B020314004)。作者简介：黄秀丽(1978一)，女，广东惠州人，博士，工程师，主要从事食品分析与检测的研究工作。’288‘食品科技2014~第3蜷第O3期FOODSCIENNCEANDTECHNOLOGY良畏品陌安呈王与==a硷胆测册that：f1)ThedevelopedHRMreal—timePCRmethodshowedagoodspecificitybydetectingonlySAwiththeTmvalueof(77．34~0．287)℃andwasnotaffectedbyoth

8、ernormalfood—bornepathogenicbacteriasuchasSalmonela，Listeriamonocytogenes，E．coliO157，eta1